モルモットの筋肉叢からのメチオニンエンケファリンの放出の直接分析：内因性オピオイドおよび外因性モルヒネによる調節

2つの縦筋肉からのメチオニン - エンケファリン（Met-Enkephalin）のin vitro放出は、モルモットの回腸からの2つの縦方向の筋肉叢ストリップから得られ、このオピオイドペプチドに特異的な放射性免疫測定法を使用して直接定量しています。電気刺激（5-80 Hz）は、Met-Enkephalinの放出速度を大幅に増加させ、その大きさは刺激の頻度に依存しませんでした。刺激の頻度の関数としてのMet-Enkephalinあたりの放出の分析は、マeentericな胎児からのこのオピオイドペプチドの放出が刺激の頻度に反比例することを示しました。電気的に誘発された放出（40 Hz）のMet-Enkephalinは、CACL2をCACL2に置き換えるか、テトロドトキシン（1マイクログラム/ml/mL）で前処理することにより、80％を超えて減少しました。誘発された放出は、モルヒネによる前処理により大幅に減少しました（1ミクロム、1.5分）。あるいは、ナイーブ縦筋の前処理骨髄膜脳神経叢は、アヘン剤拮抗薬（ - ） - ナロキソンとのストリップを引き起こしました。対照的に、（+） - ナロキソンには何らかの活性がありませんでした。これらのデータは、間接的な薬理学的実験と組み合わせて、Met-Enkephalinが腸神経系の神経伝達物質として機能することを強く示しています。さらに、Met-Enkephalinを介して伝達されるニューロンの活性は、オピオイド調節の下にあるようです。

The in vitro release of methionine-enkephalin (met-enkephalin) from two longitudinal muscle myenteric plexus strips from guinea pig ileum has been obtained during continuous superfusion and quantitated directly using a radioimmunoassay specific for this opioid peptide. Electrical stimulation (5-80 Hz) produced a significant increase in the rate of release of met-enkephalin the magnitude of which was not dependent on the frequency of stimulation. Analysis of the release of met-enkephalin per pulse as a function of the frequency of stimulation indicated that the release of this opioid peptide from the myenteric plexus is inversely proportional to the frequency of stimulation. Electrically evoked release (40 Hz) of met-enkephalin was reduced by greater than 80% by substituting CoCl2 for CaCl2 or by pretreatment with tetrodotoxin (1 microgram/ml for 15 min). Evoked release was also reduced substantially by pretreatment with morphine (1 microM, 1.5 min). Alternatively, pretreatment of naive longitudinal muscle myenteric plexus strips with the opiate antagonist (-)-naloxone caused a significant increase in the rate of met-enkephalin release in the absence of electrical stimulation. In contrast, (+)-naloxone was devoid of any activity. These data, in combination with indirect pharmacological experiments, strongly indicate that met-enkephalin functions as a neurotransmitter in the enteric nervous system. Moreover, the activity of neurons that transmit via met-enkephalin appears to be under opioid regulation.