ミオイノシトールオキシゲナーゼによって触媒された反応の可能性のある中間体としてのL-Myo-inosose-1

以前の調査では、精製された豚腎臓イノシトールオキシゲナーゼの触媒活性をアッセイするために、Fe（II）とシステインが存在する必要がありました。本研究では、この精製された非ヘム鉄酵素がグルタチオンで溶液中にゆっくりと凍結し、-20度Cで保存される場合、カタラーゼが存在する場合、活性化因子が存在する場合、活性化因子が存在する場合、活性化因子が存在する場合、活性化因子が存在している場合、存在する場合は完全に活性があることがわかりました。このより単純なアッセイシステムでは、酵素反応に対するいくつかの変数の効果を明確にすることができました。したがって、最大速度はpH依存性であり、pH 9.5前後の最大値がありますが、Myoイノシトール（空気大気）の見かけのkmは、広いpH範囲全体で5.0 mmで一定のままです。酵素はその基質ミオイノシトールに対して非常に特異的であり、酸化物質や還元剤に非常に敏感ですが、さまざまな複合剤、ヌクレオチド、スルフヒドリル試薬などの影響を受けません。-1は、酵素反応の潜在的な中間体であり、強力な競合阻害剤（Ki = 62 microM）ですが、他のイノソーゼと別の潜在的な中間体を含むD-グルコジアルデヒドを含むと考えられている溶液は、弱い阻害剤です。また、[1-2H] - および[1-3H] - メオイノシトールの場合、酵素反応では、運動核重水素同位体効果（kh/kd = 2.1）とトリチウム同位体効果（kh/kt = 7.5）の両方が観察されます。反応物として使用されます。これらの後者の結果は、オキシゲナーゼ反応が、中間体としてD-グルコディアルデヒドを持つ代替経路ではなく、L-Myo-inosose-1を中間体として関与する経路によって進行するという強力な証拠と考えられています（250語で切り捨てられた抽象化）

In previous investigations, it was necessary to have Fe(II) and cysteine present in order to assay the catalytic activity of purified hog kidney myo-inositol oxygenase. In the present study it was found that, if this purified nonheme iron enzyme is slowly frozen in solution with glutathione and stored at -20 degrees C, it is fully active in the absence of activators if catalase is present to remove adventitious H2O2. With this simpler assay system it was possible to clarify the effects of several variables on the enzymic reaction. Thus, the maximum velocity is pH-dependent with a maximum around pH 9.5, but the apparent Km for myo-inositol (air atmosphere) remains constant at 5.0 mM throughout a broad pH range. The enzyme is quite specific for its substrate myo-inositol, is very sensitive to oxidants and reductants, but is not affected by a variety of complexing agents, nucleotides, sulfhydryl reagents, etc. In other experiments it was found that L-myo-inosose-1, a potential intermediate in the enzymic reaction, is a potent competitive inhibitor (Ki = 62 microM), while other inososes and a solution thought to contain D-glucodialdehyde, another potential intermediate, are weak inhibitors. Also, both a kinetic deuterium isotope effect (kH/kD = 2.1) and a tritium isotope effect (kH/kT = 7.5) are observed for the enzymic reaction when [1-2H]- and [1-3H]-myo-inositol are used as reactants. These latter results are considered strong evidence that the oxygenase reaction proceeds by a pathway involving L-myo-inosose-1 as an intermediate rather than by an alternative pathway that would have D-glucodialdehyde as the intermediate.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)