[ラットおよびそのメタボロミック分析における原発性月経困難症に対するレオンリヘルバ水性煎じ薬の治療効果]]

この研究の目的は、原発性月経困難症（PD）に対するレオヌリ・ハーバ水性煎じ薬の治療効果を調査し、標的化されていないメタボロミクスと組み合わせて根本的なメカニズムを探索することを目的としています。40人の成体の雌ラットは、正常なグループ、モデルコントロールグループ、イブプロフェン（0.12 g・kg〜（-1））グループ、および高用量レオヌリherba水生煎じ薬（5および2.5 g・グループにランダムに分裂しました。kg〜（-1））グループ、各グループに8匹のラットがあります。PDラットモデルは、ピトシンの腹腔内注射と組み合わせたエストラジオールベンゾエートの筋肉内注射を使用して調製されました。薬物は、7日間のモデリングの4日目のgavageによって投与されました。最後の投与の後、ピトシンは腹腔内注射され、30分以内の身もだえの潜在時間と身もだえ時間が記録されました。子宮と卵巣係数が決定されました。エストラジオール（E_2）、プロゲステロン（Prog）、オキシトシン（OT）、シクロオキシゲ・ネイゼ2（COX-2）、プロスタグランジンE_2（PGE_2）、プロスタグランジンF_（2α）（PGF_（2α））、およびCa〜（2+）子宮組織のレベルは、ELISAおよび生化学キットによって測定されました。子宮および卵巣組織の形態学的変化は、ヘマトキシリン - エオシン（HE）染色によって観察されました。子宮組織におけるオキシトシン受容体（OTR）、プロスタグランジンE_2受容体3（EP3）、およびエストロゲン受容体アルファ（ERα）のタンパク質発現は、免疫組織化学によって検出されました。子宮組織におけるOTR、PGE_2受容体1-4（EP1、EP2、EP3、およびEP4）、およびPGF_（2α）受容体（FP）のmRNA発現は、定量的リアルタイムPCRによって検出されました。ターゲットメタボロミクス解析は、潜在的なバイオマーカーと濃縮代謝経路をスクリーニングして、超高性能液体クロマトグラフィクロマトグラフィークロマトグラフィクロマトグラフィーカドラポール時間質量質量分析（LC-QTOF-MS）テクノロジーによって実行されました。結果は、Leonuri HerbaがPdラットのwrithing時間を大幅に短縮し（P <0.05またはP <0.01）、子宮および卵巣係数を大幅に低下させ（P <0.01）、それらの組織形態を改善することができることを示しました。Leonuri Herbaでの治療後、PGE_2含有量は有意に増加しました（P <0.05）、COX-2、PGF_（2α）およびCa〜（2+）含有量、およびPGF_（2α）/PGE_2は大幅に減少しました（P <0.05またはP<0.01）、およびOT含有量は減少しましたが、E_2とProg含有量はPDラットの子宮組織がさらに増加する傾向がありました。それに応じて、OTRおよびEP3タンパク質の発現は、子宮組織で有意にダウンレギュレートされ（p <0.05またはp <0.01）、ERαタンパク質の発現が上方制御されました（p <0.05）。子宮組織におけるFPおよびEP4のmRNA発現は有意にダウンレギュレートされ（p <0.01）、EP1、EP3、およびOTRのmRNA発現は減少傾向を示しました。ターゲットの抑制されていないメタボロミクスの結果は、レオヌリ・ハーバ治療後のPDラットの血漿で10個の差異代謝物が回復したことを示しました。結果は、Leonuri HerbaがPDの予防と治療に効果的であり、根本的なメカニズムがPGS合成と対応する受容体結合の調節に起因する可能性があることを示しています。

This study aimed to investigate the therapeutic effect of Leonuri Herba aqueous decoction on primary dysmenorrhea(PD) and explore the underlying mechanism in conjunction with untargeted metabolomics. Forty adult female rats were randomly divi-ded into a normal group, a model control group, ibuprofen(0.12 g·kg~(-1)) group, and high-and low-dose Leonuri Herba aqueous decoction(5 and 2.5 g·kg~(-1)) groups, with eight rats in each group. The PD rat model was prepared using intramuscular injection of estradiol benzoate combined with intraperitoneal injection of pitocin. Drugs were administered by gavage from the 4th day of modeling for 7 d. After the last administration, pitocin was injected intraperitoneally, and the writhing latency and writhing times within 30 min were recorded. The uterine and ovarian coefficients were determined. Estradiol(E_2), progesterone(Prog), oxytocin(OT), cyclooxyge-nase 2(COX-2), prostaglandin E_2(PGE_2), prostaglandin F_(2α)(PGF_(2α)), and Ca~(2+) levels in uterine tissues were measured by ELISA and biochemical kits. Morphological changes in uterine and ovarian tissues were observed by hematoxylin-eosin(HE) staining. The protein expression of oxytocin receptor(OTR), prostaglandin E_2 receptor 3(EP3), and estrogen receptor alpha(ERα) in uterine tissues was detected by immunohistochemistry. The mRNA expression of OTR, PGE_2 receptors 1-4(EP1, EP2, EP3, and EP4), and PGF_(2α) receptor(FP) in uterine tissues was detected by quantitative real-time PCR. Untargeted metabolomics analysis was performed by ultra-high-performance liquid chromatography-quadrupole-time-of-flight mass spectrometry(LC-QTOF-MS) technology to screen potential biomarkers and enrich metabolic pathways. The results showed that Leonuri Herba was able to significantly reduce the writhing times in PD rats(P&lt;0.05 or P&lt;0.01), significantly reduce the uterine and ovarian coefficients(P&lt;0.01), and improve their histomorphology. After treatment with Leonuri Herba, PGE_2 content was significantly increased(P&lt;0.05), COX-2, PGF_(2α) and Ca~(2+) content, and PGF_(2α)/PGE_2 was significantly decreased(P&lt;0.05 or P&lt;0.01), and OT content was decreased, while E_2 and Prog content tended to further increase in uterine tissues of PD rats. Correspondingly, OTR and EP3 protein expression was significantly downregulated(P&lt;0.05 or P&lt;0.01) and ERα protein expression was upregulated(P&lt;0.05) in uterine tissues. The mRNA expression of FP and EP4 in uterine tissues was significantly downregulated(P&lt;0.01), and the mRNA expression of EP1, EP3, and OTR showed a decreasing trend. The untargeted metabolomics results showed that 10 differential metabolites were restored in the plasma of PD rats after Leonuri Herba treatment. The results indicate that Leonuri Herba is effective in the prevention and treatment of PD, and the underlying mechanism may be attributed to the regulation of PGs synthesis and corresponding receptor binding.