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Semliki Forest Virus（SFV）ウイルスレプリコン粒子（VRP）は、さまざまな動物モデルや臨床試験で頻繁に使用されています。キメラレプリコン粒子は、独自の生物学的特性のためにさまざまな利点を提供します。ここでは、キメラSFV/SIN VRPのための新しい3プラスミドパッケージングシステムを構築しました。sin構造タンパク質のカプシドとエンベロープは、2ヘルパープラスミドを個別に使用して生成され、SFVレプリコンにはSFVレプリカーゼ遺伝子、SINのパッケージングシグナル、外因性遺伝子、および3 'utr of sinが続きました。キメラVRPは、レポーター遺伝子としてルシフェラーゼまたはEGFPを運びました。蛍光および電子顕微鏡の結果は、キメラVRPが正常にパッケージ化されたことを明らかにしました。精製されたキメラVRPの収量は、SFV VRPの約2.5倍でした（1.38×107 Tu/ml対5.41×106 Tu/ml）（P <0.01）。さらに、キメラVRPは、少なくとも60日間、4°Cで安定して保管できます。動物実験により、キメラVRPS（ルシフェラーゼ）で免疫したマウスは、同等の量のSFV VRPS（ルシフェラーゼ）で免疫したものよりも強いルシフェラーゼ発現を有し、約12日間ルシフェラーゼを成功裏に発現しました。さらに、キメラVRPはSARS-COV-2のRBDを効率的に発現させ、マウスで堅牢なRBD特異的抗体応答を誘導しました。結論として、ここに構築されたキメラVRPは、ワクチン開発と癌療法のための遺伝子送達ツールの要件を満たしていました。
Semliki Forest Virus（SFV）ウイルスレプリコン粒子（VRP）は、さまざまな動物モデルや臨床試験で頻繁に使用されています。キメラレプリコン粒子は、独自の生物学的特性のためにさまざまな利点を提供します。ここでは、キメラSFV/SIN VRPのための新しい3プラスミドパッケージングシステムを構築しました。sin構造タンパク質のカプシドとエンベロープは、2ヘルパープラスミドを個別に使用して生成され、SFVレプリコンにはSFVレプリカーゼ遺伝子、SINのパッケージングシグナル、外因性遺伝子、および3 'utr of sinが続きました。キメラVRPは、レポーター遺伝子としてルシフェラーゼまたはEGFPを運びました。蛍光および電子顕微鏡の結果は、キメラVRPが正常にパッケージ化されたことを明らかにしました。精製されたキメラVRPの収量は、SFV VRPの約2.5倍でした（1.38×107 Tu/ml対5.41×106 Tu/ml）（P <0.01）。さらに、キメラVRPは、少なくとも60日間、4°Cで安定して保管できます。動物実験により、キメラVRPS（ルシフェラーゼ）で免疫したマウスは、同等の量のSFV VRPS（ルシフェラーゼ）で免疫したものよりも強いルシフェラーゼ発現を有し、約12日間ルシフェラーゼを成功裏に発現しました。さらに、キメラVRPはSARS-COV-2のRBDを効率的に発現させ、マウスで堅牢なRBD特異的抗体応答を誘導しました。結論として、ここに構築されたキメラVRPは、ワクチン開発と癌療法のための遺伝子送達ツールの要件を満たしていました。
Semliki Forest virus (SFV) viral replicon particles (VRPs) have been frequently used in various animal models and clinical trials. Chimeric replicon particles offer different advantages because of their unique biological properties. We here constructed a novel three-plasmid packaging system for chimeric SFV/SIN VRPs. The capsid and envelope of SIN structural proteins were generated using two-helper plasmids separately, and the SFV replicon contained the SFV replicase gene, packaging signal of SIN, subgenomic promoter followed by the exogenous gene, and 3' UTR of SIN. The chimeric VRPs carried luciferase or eGFP as reporter genes. The fluorescence and electron microscopy results revealed that chimeric VRPs were successfully packaged. The yield of the purified chimeric VRPs was approximately 2.5 times that of the SFV VRPs (1.38 × 107 TU/ml vs. 5.41 × 106 TU/ml) (p < 0.01). Furthermore, chimeric VRPs could be stored stably at 4°C for at least 60 days. Animal experiments revealed that mice immunized with chimeric VRPs (luciferase) had stronger luciferase expression than those immunized with equivalent amount of SFV VRPs (luciferase) (p < 0.01), and successfully expressed luciferase for approximately 12 days. Additionally, the chimeric VRPs expressed the RBD of SARS-CoV-2 efficiently and induced robust RBD-specific antibody responses in mice. In conclusion, the chimeric VRPs constructed here met the requirements of a gene delivery tool for vaccine development and cancer therapy.
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