VSV-G偽型バキュロウイルスを生成するための安定したSF9昆虫細胞株の開発

バキュロウイルスは、哺乳類の遺伝子送達ベクターとして大きな可能性を示していますが、遺伝子の移動における有効性は細胞株によって異なります。伝達効率を改善するために広く採用されている戦略は、ウイルスベクターの仮想型です。この研究では、小胞口炎ウイルスのGタンパク質を誘惑的に誘惑的に発現させる安定したSF9昆虫細胞株を発達させることを目的としました。これは、非常に強力で感染誘導性のPXXLプロモーターの制御下でVSV-G遺伝子を挿入することによって得られ、その後、VSV-Gのフソジェン特性と感染細胞のその発現レベルによって選択されたオリゴクローナル株を確立するために拡張されました。そして、乱れた芽生えたビリオン。次に、細胞株のパフォーマンスを向上させるために、機能的な仮名型バキュロウイルスが得られる感染症の状態が最適化されました。最後に、異なるバキュロウイルスを偽物にし、導入遺伝子の発現は、フローサイトメトリーを使用して多様な起源の哺乳類細胞で定量化されました。偽型バキュロウイルスの形質導入効率は、対照ウイルスと比較して、すべての試験済みの哺乳類細胞株で一貫して増加しました。これらの発見は、擬似タイピング遺伝子をバシュロウイルスゲノムに挿入する必要なく、遺伝子送達性能を改善する可能性と利点を示しています。

Baculoviruses have shown great potential as gene delivery vectors in mammals, although their effectiveness in transferring genes varies across different cell lines. A widely employed strategy to improve transduction efficiency is the pseudotyping of viral vectors. In this study, we aimed to develop a stable Sf9 insect cell line that inducibly expresses the G-protein of the vesicular stomatitis virus to pseudotype budded baculoviruses. It was obtained by inserting the VSV-G gene under the control of the very strong and infection-inducible pXXL promoter and was subsequently diluted to establish oligoclonal lines, which were selected by the fusogenic properties of VSV-G and its expression levels in infected cells and purified budded virions. Next, to enhance the performance of the cell line, the infection conditions under which functional pseudotyped baculoviruses are obtained were optimized. Finally, different baculoviruses were pseudotyped and the expression of the transgene was quantified in mammalian cells of diverse origins using flow cytometry. The transduction efficiency of pseudotyped baculovirus consistently increased across all tested mammalian cell lines compared with control viruses. These findings demonstrate the feasibility and advantages of improving gene delivery performance without the need to insert the pseudotyping gene into the baculoviral genomes.