M1AライターTRMT6/TRMT61Aの枯渇は、膀胱がんの細胞ストレスに対する増殖と耐性を低下させます

背景：膀胱がん（BLCA）は一般的で致命的な病気であり、患者の生活の質の低下と社会の重大な経済的負担をもたらします。臨床結果を改善するには、腫瘍形成のより良い理解が必要です。最近の証拠は、BLCAの病因において、RNA修飾M1Aとその調節タンパク質TRMT6/TRMT61AおよびALKBH3を置いています。 方法：TRMT6/TRMT61A、ALKBH1、およびALKBH3発現は、QRT-PCRおよびウエスタンブロット分析を介して、ヒトBLCA細胞株および正常な尿路上皮細胞株で調べられました。このBLCA細胞株パネルの増殖、移動、および変位を評価するために、プレストブルー細胞生存率試薬、創傷治癒アッセイ、およびライブセルイメージングベースの細胞変位分析を実施しました。細胞の生存は、細胞ストレスを誘導し、折り畳まれたタンパク質応答（UPR）をチュニカマイシンで活性化した後に評価されました。さらに、TRMT6/TRMT61Aの生物学的役割を調査するために、2つのBLCA細胞株（5637およびHT1197）のsiRNA媒介遺伝子サイレンシングを実施しました。 結果：検査された細胞株のパネル間で、M1A調節因子の不均一な形態、増殖、変位、ツニカマイシン感受性、および発現レベルが観察されました。一般に、SV-HUC-1と比較すると、BLCA細胞株でTRMT61A発現が増加しました。TRMT6/TRMT61Aの枯渇は、5637およびHT1197細胞株の両方で増殖能力を低下させました。5637の平均細胞変位は、TRMT6/TRMT61Aの枯渇時にも減少しました。興味深いことに、TRMT6/TRMT61A枯渇は、HT1197ではそうではなく、5637のATF6-Branchに関連する標的のmRNA発現を減少させました。さらに、5637でのTRMT6/TRMT61Aノックダウンの後、細胞ストレスの誘導後の細胞生存は損なわれましたが、HT1197細胞では侵害されませんでした。 結論：調査結果は、TRMT6/TRMT61AがBLCAで発癌性の役割を果たし、細胞ストレスに対するBLCA細胞の脱感作に関与していることを示唆しています。TRMT6/TRMT61A発現の調節に関するさらなる調査と細胞ストレス耐性への影響は、将来のBLCA治療の洞察を提供する可能性があります。

BACKGROUND: Bladder cancer (BLCA) is a common and deadly disease that results in a reduced quality of life for the patients and a significant economic burden on society. A better understanding of tumorigenesis is needed to improve clinical outcomes. Recent evidence places the RNA modification m1A and its regulatory proteins TRMT6/TRMT61A and ALKBH3 in BLCA pathogenesis. METHODS: TRMT6/TRMT61A, ALKBH1, and ALKBH3 expression was examined in human BLCA cell lines and a normal urinary tract epithelium cell line through qRT-PCR and western blot analysis. Prestoblue Cell Viability Reagent, wound-healing assay, and live-cell imaging-based cell displacement analysis, were conducted to assess proliferation, migration, and displacement of this BLCA cell line panel. Cell survival was assessed after inducing cellular stress and activating the unfolded protein response (UPR) with tunicamycin. Moreover, siRNA-mediated gene silencing in two BLCA cell lines (5637 and HT1197) was conducted to investigate the biological roles of TRMT6/TRMT61A. RESULTS: Heterogeneous morphology, proliferation, displacement, tunicamycin sensitivity, and expression levels of m1A regulators were observed among the panel of cell lines examined. In general, TRMT61A expression was increased in BLCA cell lines when compared to SV-HUC-1. Depletion of TRMT6/TRMT61A reduced proliferation capacity in both 5637 and HT1197 cell lines. The average cell displacement of 5637 was also reduced upon TRMT6/TRMT61A depletion. Interestingly, TRMT6/TRMT61A depletion decreased mRNA expression of targets associated with the ATF6-branch of the UPR in 5637 but not in HT1197. Moreover, cell survival after induction of cellular stress was compromised after TRMT6/TRMT61A knockdown in 5637 but not in HT1197 cells. CONCLUSION: The findings suggest that TRMT6/TRMT61A plays an oncogenic role in BLCA and is involved in desensitizing BLCA cells against cellular stress. Further investigation into the regulation of TRMT6/TRMT61A expression and its impact on cellular stress tolerance may provide insights for future BLCA treatment.