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はじめに：この研究の目的は、2021年10月から3月に北イタリア病院の集中治療室から収集された21セフタジジム/アビバクタム耐性（CZA-R）クレブシエラ肺炎株の分子特性評価でした。 方法：選択的/発色培地培地および感受性テスト評価の成長後、ハイブリスポット12マルチプレックス、PCRおよび全ゲノムシーケンス（WGS）によってすべての分離株に対して耐性遺伝子含有量が確認されました。クローン性は、パスツールスキームに従ってPFGEとMLSTによって評価されました。SNPSベースの系統樹が、代表的な分離株とグローバルゲノムを比較して得られました。BLAKPC遺伝子水平伝達は、共役実験によって評価されました。BLAKPC-166はPCR2.1ベクターでクローン化され、化学的に有能なTop10細胞で形質転換されました。 結果：16人の入院患者が、KPC産生肺炎（KPC-KP）株によるコロニー形成および/または感染症に陽性でした。得られた21のCZA-R KPC-KP分離株は、MDRの表現型を示しました。メロペネムに対する感受性は常に保持されていました。すべてのCZA-R KPC-KPは、BLAKPC-166という名前の新しいBlakPCバリアントを提示し、BlakPC-94と比較して単一のヌクレオチド置換（T811C）を示しました。しかし、BLAKPC-2に関連しています。 2つの異なるパルソタイプが検出されました。18/21では1/21症例では、同じ患者からの2つの株がPFGEによって型投げられません。興味深いことに、ST22、ST6342、ST6418、およびST6811も特定され、KPC-166に関連しているが、アウトブレイクは高リスクのクローンST307によって維持されていましたが、発生は維持されていました。心配なことに、BlakPC-166は水平に転送され、クローニング後、CZAに対する抵抗を付与しました。 ディスカッション：この新しいバリアントは、CZA耐性とカルバペネムの感受性回復をもたらします。KPC-166が複数のKPクローンで表現されていることがわかったため、イタリアの臨床設定におけるそのような株のさらなる普及を防ぐために、より多くの努力をする必要があります。
はじめに：この研究の目的は、2021年10月から3月に北イタリア病院の集中治療室から収集された21セフタジジム/アビバクタム耐性（CZA-R）クレブシエラ肺炎株の分子特性評価でした。 方法：選択的/発色培地培地および感受性テスト評価の成長後、ハイブリスポット12マルチプレックス、PCRおよび全ゲノムシーケンス（WGS）によってすべての分離株に対して耐性遺伝子含有量が確認されました。クローン性は、パスツールスキームに従ってPFGEとMLSTによって評価されました。SNPSベースの系統樹が、代表的な分離株とグローバルゲノムを比較して得られました。BLAKPC遺伝子水平伝達は、共役実験によって評価されました。BLAKPC-166はPCR2.1ベクターでクローン化され、化学的に有能なTop10細胞で形質転換されました。 結果：16人の入院患者が、KPC産生肺炎（KPC-KP）株によるコロニー形成および/または感染症に陽性でした。得られた21のCZA-R KPC-KP分離株は、MDRの表現型を示しました。メロペネムに対する感受性は常に保持されていました。すべてのCZA-R KPC-KPは、BLAKPC-166という名前の新しいBlakPCバリアントを提示し、BlakPC-94と比較して単一のヌクレオチド置換（T811C）を示しました。しかし、BLAKPC-2に関連しています。 2つの異なるパルソタイプが検出されました。18/21では1/21症例では、同じ患者からの2つの株がPFGEによって型投げられません。興味深いことに、ST22、ST6342、ST6418、およびST6811も特定され、KPC-166に関連しているが、アウトブレイクは高リスクのクローンST307によって維持されていましたが、発生は維持されていました。心配なことに、BlakPC-166は水平に転送され、クローニング後、CZAに対する抵抗を付与しました。 ディスカッション：この新しいバリアントは、CZA耐性とカルバペネムの感受性回復をもたらします。KPC-166が複数のKPクローンで表現されていることがわかったため、イタリアの臨床設定におけるそのような株のさらなる普及を防ぐために、より多くの努力をする必要があります。
INTRODUCTION: Aim of the study was the molecular characterization of 21 ceftazidime/avibactam resistant (CZA-R) Klebsiella pneumoniae strains, collected in the period October 2021-March 2022 from an Intensive Care COVID Unit in a Northern Italian Hospital. METHODS: After growth on selective/chromogenic culture media and susceptibility tests assessment, resistance genes content was ascertained for all the isolates by the HybriSpot 12 multiplexing, PCR and Whole-Genome Sequencing (WGS). Clonality was assessed by PFGE and MLST according to the Pasteur scheme. A SNPs-based phylogenetic tree was obtained comparing representative isolates and global genomes. The blaKPC gene horizontal transmission was evaluated by conjugation experiments. blaKPC-166 was cloned in a pCR2.1 vector and transformed in chemically competent TOP10 cells. RESULTS: Sixteen inpatients resulted positive for colonization and/or infection by KPC-producing K. pneumoniae (KPC-Kp) strains. The 21 CZA-R KPC-Kp isolates obtained showed MDR phenotype; susceptibility to meropenem was always retained. All the CZA-R KPC-Kp presented a novel blaKPC variant, named blaKPC-166, showing a single nucleotide substitution (T811C) compared to the blaKPC-94; but related to blaKPC-2. TWO DIFFERENT PULSOTYPES WERE DETECTED: A in 18/21 and B in 1/21 cases, two strains from the same patient being untypable by PFGE. Interestingly, the outbreak was sustained by the high-risk clone ST307, although the ST22, ST6342, ST6418 and ST6811 have also been identified and associated to KPC-166. Worryingly, blaKPC-166 could be transferred horizontally and, after cloning, it conferred resistance to CZA. DISCUSSION: This novel variant confers CZA-resistance and carbapenems susceptibility restoration. As KPC-166 was found expressed by multiple Kp clones, greater efforts should be made to prevent the further dissemination of such strains in Italian clinical settings.
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