アモトサレン/UVA処理した血小板濃縮物におけるリンタンパク質発現の増加

背景：病原体不活性化治療（PIT）は、血小板機能、表現型、形態学を変化させ、血小板濃縮物（PC）のより速い老化を誘導することが示されています。細胞レベルでのピットの影響を理解するために、重要な情報はまだ欠落しています。 目的：この研究では、翻訳後の修正（PTM）の観点から、PCSに対するアモトサレン/UVAの影響を調査しました。アモトサレン/UVA治療の直後に、未処理のPCと比較して、休止した血小板に対してリン生成分析を実施しました。 方法：1日目の後に、PIT（Amotosalen/UVA）を未処理のPCと比較するために、2腕の研究設定を実施しました。プールとスプリットのアプローチに基づいて、12個のPCが2つのグループ（処理および未処理）に分割されました。TMTテクノロジーを使用して定量的リンプロテオミクスを実行して、PITの直後のリンタンパク質の変化を研究しました。 結果：合計3,906個のタンパク質と7,334個のホスホサイトが同定され、少なくとも5〜6個の複製で2,473個のタンパク質と2,214個のホスホジットが観察されました。未処理の血小板と比較して、ピット血小板はリン酸化効果のアップレギュレーションを示し、109個のホスホサイトが2倍以上の変化と同定されました。2つの経路が明確に特定されました。マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（MAPK）カスケードは、顆粒分泌とPS15 HSPB1の活性化を引き起こします。アモトサレン/UVA治療後のミオシン軽鎖（MLC）タンパク質のスレオニン18およびセリン19リン酸化の阻害では、形状変化経路の1つが観察されました。 結論：この研究は、安静時血小板に対するリンタンパク質の視点からのアモトサレン/UVA治療の影響に関する深い洞察を提供します。異なる血小板経路に属するタンパク質のリン酸化の明確な変化が定量化されました。この発見は、以前の発見を裏付け、血小板に対する光化学治療の効果の不足している部分を満たしています。

BACKGROUND: Pathogen inactivation treatment (PIT) has been shown to alter platelet function, phenotype, morphology and to induce a faster aging of platelet concentrates (PCs). Key pieces of information are still missing to understand the impacts of PITs at the cellular level. OBJECTIVES: This study investigated the impact of amotosalen/UVA on PCs, from a post-translational modifications (PTM) point of view. Phosphoproteomic analyses were conducted on resting platelets, right after the amotosalen/UVA treatment and compared with untreated PCs. METHOD: A two-arm study setting was carried out to compare PIT (amotosalen/UVA) to untreated PCs, on day 1 post-donation. Based on a pool-and-split approach, 12 PCs were split into two groups (treated and untreated). Quantitative phosphoproteomics was performed using TMT technology to study the changes of phosphoproteins right after the PIT. RESULTS: A total of 3,906 proteins and 7,334 phosphosites were identified, and 2,473 proteins and 2,214 phosphosites were observed in at least 5 to 6 replicates. Compared to untreated platelets, PIT platelets exhibited an upregulation of the phosphorylation effects, with 109 phosphosites identified with a higher than 2-fold change. Two pathways were clearly identified. The mitogen activated protein kinases (MAPKs) cascade, which triggers the granule secretion and the activation of the pS15 HSPB1. One of the shape change pathways was also observed with the inhibition of the Threonine 18 and Serine 19 phosphorylations on myosin light chain (MLC) protein after the amotosalen/UVA treatment. CONCLUSIONS: This work provides a deep insight into the impact of amotosalen/UVA treatment from a phosphoprotein viewpoint on resting platelets. Clear changes in phosphorylation of proteins belonging to different platelet pathways were quantified. This discovery corroborates previous findings and fills missing parts of the effect of photochemical treatments on platelets.