Haliotis Discus HannaiからのMacin、HDMACの分子特性、発現および抗菌機能

マシンは抗菌ペプチドのファミリーであり、侵入病原体の除去に複数の役割を果たします。本研究では、マシンがクローン化され、太平洋アワリオネ・ハリオティスディスカスハンナイ（HDMACと呼ばれる）から特徴付けられました。保存されたドメインの分析は、HDMACがMacinファミリーの新しいメンバーであることを示唆しています。非刺激アバロンでは、HDMAC転写産物は、5つのテストされた組織すべて、特に血球で構成的に発現しました。Vibrio harveyi刺激後、血球中のHDMAC mRNAの発現は12時間で有意にアップレギュレートされました（P <0.01）。HDMAC転写産物のRNAiを介したノックダウンは、V。Harveyiに対するアバロンの生存率に影響を与えました。さらに、HDMAC（RHDMAC）の組換えタンパク質は、特にAnguillarumの侵入細菌に対して高い抗菌活性を示しました。さらに、RHDMACは、in vitroではキチンではなく、グルカン、リポ多糖（LPS）、およびペプチドグリカン（PGN）への結合活性を持っていました。膜の完全性分析により、RHDMACが細菌の膜透過性を高めることができることが明らかになりました。一方、血球の食作用と走化性能力の両方は、RHDMACによって大幅に増強される可能性があります。全体として、結果は、HDMACがH. discus hannaiの免疫応答に関与する汎用分子として機能できることを示しました。

Macins are a family of antimicrobial peptides, which play multiple roles in the elimination of invading pathogens. In the present study, a macin was cloned and characterized from Pacific abalone Haliotis discus hannai (Designated as HdMac). Analysis of the conserved domain suggested that HdMac was a new member of the macin family. In non-stimulated abalones, HdMac transcripts were constitutively expressed in all five tested tissues, especially in hemocytes. After Vibrio harveyi stimulation, the expression of HdMac mRNA in hemocytes was significantly up-regulated at 12 hr (P < 0.01). RNAi-mediated knockdown of HdMac transcripts affected the survival rates of abalone against V. harveyi. Moreover, recombinant protein of HdMac (rHdMac) exhibited high antibacterial activities against invading bacteria, especially for Vibrio anguillarum. In addition, rHdMac possessed binding activities towards glucan, lipopolysaccharides (LPS), and peptidoglycan (PGN), but not chitin in vitro. Membrane integrity analysis revealed that rHdMac could increase the membrane permeability of bacteria. Meanwhile, both the phagocytosis and chemotaxis ability of hemocytes could be significantly enhanced by rHdMac. Overall, the results showed that HdMac could function as a versatile molecule involved in immune responses of H. discus hannai.