多重化イオンビームイメージングを使用した高次元組織イメージングのヒッチハイカーガイド

多重化された組織イメージング技術の進歩は、疾患の文脈における組織の微小環境の影響の理解を形作るために不可欠です。これらの技術により、個々の細胞の表現型を組織の組織と機能における高次の役割に関連付けることができます。多重化イオンビームイメージング（MIBI）は、そのような技術の1つであり、金属同位体標識抗体と二次イオン質量分析（SIMS）を使用して、単一の組織断面内で40以上のタンパク質マーカーを同時に画像化します。ここでは、抗原回復、金属同位体結合抗体染色、MIBI機器を使用したイメージング、およびその後のデータ処理と分析後のホルマリン固定パラフィン包埋（FFPE）組織の高プレックス分析のための最適化されたMIBIワークフローについて説明します。このワークフローは、MIBIを使用したヒトFFPEサンプルのイメージングに焦点を当てていますが、このワークフローは、モデルシステム、生物学的質問、および多重化されたイメージングモダリティに簡単に拡張できます。

Advancements in multiplexed tissue imaging technologies are vital in shaping our understanding of tissue microenvironmental influences in disease contexts. These technologies now allow us to relate the phenotype of individual cells to their higher-order roles in tissue organization and function. Multiplexed Ion Beam Imaging (MIBI) is one of such technologies, which uses metal isotope-labeled antibodies and secondary ion mass spectrometry (SIMS) to image more than 40 protein markers simultaneously within a single tissue section. Here, we describe an optimized MIBI workflow for high-plex analysis of Formalin-Fixed Paraffin-Embedded (FFPE) tissues following antigen retrieval, metal isotope-conjugated antibody staining, imaging using the MIBI instrument, and subsequent data processing and analysis. While this workflow is focused on imaging human FFPE samples using the MIBI, this workflow can be easily extended to model systems, biological questions, and multiplexed imaging modalities.