新規骨髄細胞分化誘導誘発性としてのトリシリビンの同定

急性前骨髄球性白血病（APL）のための全トランスレチノイン酸（ATRA）を使用した分化療法は十分に確立されています。ただし、ATRAの狭いアプリケーションと耐性の発達を改善する必要があるため、別の効率的な骨髄分化誘導を検索しました。キナーゼの活性化は、白血病生物学と分化ブロックに関与しています。新しい骨髄分化誘導因子を特定するために、キナーゼ阻害剤スクリーニングライブラリーを使用しました。NB4 APL細胞を使用したニトロブルーテトラゾリウム色素還元アッセイとリアルタイムの定量的PCRを使用して、PD169316、SB203580、SB202190（P38 MAPK阻害剤）、およびトリシリビン（TCN）（AKT阻害剤）がCD11Bの発現を強化することを明らかにしました。TCNは、進行した血液悪性腫瘍の患者によって忍容性が高いと報告されているため、焦点を当てました。核/細胞質（N/C）比が有意に減少し、骨髄球球マーカー（CD11BおよびCD11C）は、NB4および急性骨髄性白血病（AML）M2由来HL-60細胞の両方でTCNによって強力に誘導されました。NB4細胞を使用したウエスタンブロット分析により、TCNはERK1/2リン酸化を促進したが、P38 MAPKリン酸化が影響を受けていないことを実証し、ERK経路の活性化がTCN誘導分化に関与していることを示唆した。さらに、ATRAがERKとP38のリン酸化に影響を与える可能性があるかどうかを調べ、明らかな効果がないことを発見し、ATRA誘発性分化がTCN効果とは異なることを示唆しています。TCN誘導分化に関与する分子メカニズムを明らかにするために、マイクロアレイ分析を実行しました。Davidソフトウェアを使用した経路分析は、「造血細胞系統」および「サイトカイン - シトカイン受容体の相互作用」経路が高い有意性で濃縮されていることを示しました。リアルタイムPCR分析により、IL1β、CD3D、IL5RA、ITGA6、CD44、ITGA2B、CD37、CD9、CSF2RA、およびIL3RAを含むこれらの経路の成分がTCN誘発性分化によって上方制御されることが示されました。総称して、TCNは新規骨髄細胞分化誘導因子であると特定し、APLおよび非APL白血病のTCNの試験は将来の探査に値します。

Differentiation therapy using all-trans retinoic acid (ATRA) for acute promyelocytic leukemia (APL) is well established. However, because the narrow application and tolerance development of ATRA need to be improved, we searched for another efficient myeloid differentiation inducer. Kinase activation is involved in leukemia biology and differentiation block. To identify novel myeloid differentiation inducers, we used a Kinase Inhibitor Screening Library. Using a nitroblue tetrazolium dye reduction assay and real-time quantitative PCR using NB4 APL cells, we revealed that, PD169316, SB203580, SB202190 (p38 MAPK inhibitor), and triciribine (TCN) (Akt inhibitor) potently increased the expression of CD11b. We focused on TCN because it was reported to be well tolerated by patients with advanced hematological malignancies. Nuclear/cytoplasmic (N/C) ratio was significantly decreased, and myelomonocytic markers (CD11b and CD11c) were potently induced by TCN in both NB4 and acute myeloid leukemia (AML) M2 derived HL-60 cells. Western blot analysis using NB4 cells demonstrated that TCN promoted ERK1/2 phosphorylation, whereas p38 MAPK phosphorylation was not affected, suggesting that activation of the ERK pathway is involved in TCN-induced differentiation. We further examined that whether ATRA may affect phosphorylation of ERK and p38, and found that there was no obvious effect, suggesting that ATRA induced differentiation is different from TCN effect. To reveal the molecular mechanisms involved in TCN-induced differentiation, we performed microarray analysis. Pathway analysis using DAVID software indicated that "hematopoietic cell lineage" and "cytokine-cytokine receptor interaction" pathways were enriched with high significance. Real-time PCR analysis demonstrated that components of these pathways including IL1β, CD3D, IL5RA, ITGA6, CD44, ITGA2B, CD37, CD9, CSF2RA, and IL3RA, were upregulated by TCN-induced differentiation. Collectively, we identified TCN as a novel myeloid cell differentiation inducer, and trials of TCN for APL and non-APL leukemia are worthy of exploration in the future.