PMA分化THP-1マクロファージとその検証のLPSおよびATP誘発死亡

細胞死は、すべての生きている生物の基本的なプロセスです。このプロトコルは、細胞死を観察するためのヒト単球（THP-1）マクロファージモデルにおけるリポ多糖（LPS）およびアデノシン三リン酸（ATP）誘発性ホルボル-12-ミリスチャ酸-13-アセテート（PMA）拡散脂質脂質を確立します。ATPと組み合わされたLPSは、しばしば発熱症の研究に使用される古典的な炎症誘導法ですが、アポトーシスとネクロトーシスもLPS/ATPによる刺激に反応します。通常の状況では、ホスファチジルセリンは原形質膜の内側のリーフレットにのみ局在しています。しかし、ピロトーシス、アポトーシス、およびネクロトーシスの初期段階では、細胞膜は無傷のままでホスファチジルセリンにさらされ、後期段階では、細胞膜はその完全性を失います。ここでは、フローサイトメトリーを使用して、細胞全体からの細胞死を検出するために、アネキシンVおよび7-アミノアクチノマイシンD（AAD）二重染色を分析しました。結果は、LPS/ATPによる刺激後に実質的な細胞が死亡したことを示しています。走査型電子顕微鏡を使用して、個々の細胞での細胞死の可能性のある形態を観察します。結果は、LPS/ATPでの刺激後に細胞がピトーシス、アポトーシス、またはネクロトーシスを受ける可能性があることを示しています。このプロトコルは、LPS/ATPによる刺激後のマクロファージの死を観察することに焦点を当てています。結果は、LPSおよびATP刺激後の細胞死はパイロプトーシスに限定されず、アポトーシスと壊死性アポトーシスも発生し、研究者がLPSおよびATP刺激後の細胞死をよりよく理解し、より良い実験方法を選択することを示しました。

Cell death is a fundamental process in all living organisms. The protocol establishes a lipopolysaccharide (LPS) and adenosine triphosphate (ATP)-induced phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA)-differentiated lipid deposition in human monocyte (THP-1) macrophage model to observe cell death. LPS combined with ATP is a classic inflammatory induction method, often used to study pyroptosis, but apoptosis and necroptosis also respond to stimulation by LPS/ATP. Under normal circumstances, phosphatidylserine is only localized in the inner leaflet of the plasma membrane. However, in the early stages of pyroptosis, apoptosis, and necroptosis, the cell membrane remains intact and exposed to phosphatidylserine, and in the later stages, the cell membrane loses its integrity. Here, flow cytometry was used to analyze Annexin V and 7-Aminoactinomycin D (AAD) double staining to detect the cell death from the whole cells. The results show that substantial cells died after stimulation with LPS/ATP. Using scanning electron microscopy, we observe the possible forms of cell death in individual cells. The results indicate that cells may undergo pyroptosis, apoptosis, or necroptosis after stimulation with LPS/ATP. This protocol focuses on observing the death of macrophages after stimulation with LPS/ATP. The results showed that cell death after LPS and ATP stimulation is not limited to pyroptosis and that apoptosis and necrotic apoptosis can also occur, helping researchers better understand cell death after LPS and ATP stimulation and choose a better experimental method.