GrandeおよびPetite酵母からのミトコンドリアRNAの転写、処理、およびマッピング

小柄な酵母株のミトコンドリアRNA（MTRNA）は、アガロース尿素、アクリルアミド - 尿素、アガロース - メチル水酸化水素ゲルの電気泳動、およびジアゾベンジルオキシメチルペーパーへの移動およびハイブリジオ化によって分析されました。小柄なものには、21秒や14秒のRRNAなどの加工種を含む多数のミトコンドリア転写産物が含まれています。小柄な転写産物は、3つのクラスに分類されることがわかりました。1）Grande Mtrna種と共感するバンド。2）複数の株で見つかった「グループ固有の」新しいバンドは、ミトコンドリアゲノムの特定の領域と一致する。3）個々の小柄な系統でのみ見られる「ひずみ固有の」新しいバンド。削除マップが構築されました。このマップでは、特定の株に最初の2種類のMTRNAバンドの存在または不在を使用し、これらの株の制限エンドヌクレアーゼマップを使用しました。このマップにより、21秒と14秒のrRNAの局在が確認されました。これは、以前はハイブリダイゼーションによってマッピングされ、20以上の追加のMTRNA種を局在化しました。MtrNA種は、ゲノムの領域にグループ化されており、それらの多くが完全に処理されたMtrNA種の前駆体であることを強く示唆しています。Grande Mtrnaとクローン化されたmtDNAフラグメントを使用したハイブリダイゼーション実験により、同じ種類の転写産物グループが示されています。他のハイブリダイゼーション実験により、5500および4500ヌクレオチドを測定する21秒のrRNA（3700ヌクレオチド）の2つの見かけの前駆体が実証されています。加工されたTRNAは、P（パロモマイシン耐性）遺伝子座の近くにゲノムの特定の領域を含む小柄でのみ見られます。この領域が存在しない場合、P軌跡からかなり離れたtRNA遺伝子であっても、処理されたTRNAは検出されません。この表現型はミトコンドリアタンパク質合成を欠く小柄で発現しているため、ミトコンドリアゲノムの特定の位置にマップするため、ミトコンドリアTRNAの処理に役割を果たすmtrNA種があるようです。

Mitochondrial RNA (mtRNA) from petite yeast strains was analyzed by electrophoresis in agarose-urea, acrylamide-urea, and agarose-methyl mercuric hydroxide gels, and by transfer to diazobenzyloxy-methyl paper and hybridization to labeled mitochondrial DNA (mtDNA). Petites contain numerous mitochondrial transcripts, including processed species like 21 S and 14 S rRNA. Petite transcripts were found to fall into three classes: 1) bands that comigrate with grande mtRNA species; 2) "group-specific" new bands found in multiple strains and coinciding with specific regions of the mitochondrial genome; and 3) "strain-specific" new bands found only in individual petite strains. A deletion map was constructed in which we used the presence or absence of the first two types of mtRNA bands in specific strains, and the restriction endonuclease map of these strains. This map confirmed the localization of 21 S and 14 S rRNA, which were mapped previously by hybridization, and also localized more than 20 additional mtRNA species. The mtRNA species were grouped in regions of the genome in a fashion that strongly suggests that many of them are precursors to fully processed mtRNA species. Hybridization experiments with grande mtRNA and cloned mtDNA fragments have shown the same kind of transcript grouping. Other hybridization experiments have demonstrated two apparent precursors to 21 S rRNA (3700 nucleotides) measuring 5500 and 4500 nucleotides. Processed tRNAs are found only in petites that contain a specific region of the genome near the P (paromomycin resistance) locus. When this region is absent, processed tRNAs are not detected, even for tRNA genes quite distant from the P locus. Since this phenotype is expressed in petites that lack mitochondrial protein synthesis, and since it maps to a specific location in the mitochondrial genome, there appears to be a mtRNA species which has a role in processing of mitochondrial tRNA.