ヒト子宮内膜子宮内膜がんにおけるタイトジャンクションプロテインシングリンの役割

両細胞タイトジャンクション分子シングリン（CGN）は、中心体の微小管に結合します。さらに、CGNは、トリセルラータイト接合部（TTJ）タンパク質脂肪分解抑制リポタンパク質受容体（LSR）およびトリセルリン（TRIC）に寄与します。CGNとLSRは、子宮内膜子宮内膜がん（EEC）の悪性腫瘍中に減少しました。TTJタンパク質LSRは、EECを含む一部の癌の悪性腫瘍に関与していますが、CGNの役割は不明です。この研究では、CGN-oferExpressing EEC細胞株Sawanoを使用して、ヒトEEC細胞におけるTTJタンパク質を使用したCGNの役割を調査しました。2D培養では、CGNは、TTJまたはγ-チューブリン陽性の中心体でLSRおよびTRICと共局在しました。CGN抗体による免疫沈降では、LSR、TRIC、およびβ-チューブリンに直接結合したCGN。siRNAによるCGNのノックダウンは、上皮バリアを減少させ、細胞増殖、移動、浸潤を強化し、LSRのノックダウンを促進しました。正常なヒト子宮内膜間質細胞と共培養されたSawano細胞では、CGNのノックダウンは、MAPKおよびAMPK経路を介してLSRおよびTRICの発現を減少させました。2.5D培養では、CGNのノックダウンが異常嚢胞の形成を誘発し、FD-4の内腔への透過性を増加させました。2Dおよび2.5D培養では、EGFまたはTGF-βの有無にかかわらずβ-エストラジオールによる治療は、CGN発現と上皮透過性バリアおよび細胞移動の増強、およびEW7197+AG1478、U0126、または抗IL-6抗体による前処理を減少させました。これ。結論として、TTJタンパク質を含むCGNは、ヒトEECの悪性腫瘍を抑制する可能性があり、その複雑なタンパク質は、間質細胞に由来するエストロゲンおよび成長因子に敏感です。

The bicellular tight junction molecule cingulin (CGN) binds to microtubules in centrosomes. Furthermore, CGN contributes to the tricellular tight junction (tTJ) proteins lipolysis-stimulated lipoprotein receptor (LSR) and tricellulin (TRIC). CGN as well as LSR decreased during the malignancy of endometrioid endometrial cancer (EEC). Although tTJ protein LSR is involved in the malignancy of some cancers, including EEC, the role of CGN is unknown. In this study, we investigated the roles of CGN with tTJ proteins in human EEC cells by using the CGN-overexpressing EEC cell line Sawano. In 2D cultures, CGN was colocalized with LSR and TRIC at tTJ or at γ-tubulin-positive centrosomes. In immunoprecipitation with CGN antibodies, CGN directly bound to LSR, TRIC, and β-tubulin. Knockdown of CGN by the siRNA decreased the epithelial barrier and enhanced cell proliferation, migration and invasion, as well as knockdown of LSR. In the Sawano cells cocultured with normal human endometrial stromal cells, knockdown of CGN decreased expression of LSR and TRIC via MAPK and AMPK pathways. In 2.5D cultures, knockdown of CGN induced the formation of abnormal cysts and increased the permeability of FD-4 to the lumen. In 2D and 2.5D cultures, treatment with β-estradiol with or without EGF or TGF-β decreased CGN expression and the epithelial permeability barrier and enhanced cell migration, and pretreatment with EW7197+AG1478, U0126 or an anti-IL-6 antibody prevented this. In conclusion, CGN, with tTJ proteins might suppress the malignancy of human EEC and its complex proteins are sensitive to estrogen and growth factors derived from stromal cells.