CCケモカイン受容体1の阻害は、PPAR-γを活性化することにより、マウスの変形性関節症を改善します

背景：変形性関節症（OA）は、軟骨の破壊と炎症を特徴とする変性関節疾患です。ケモカインファミリーとその受容体ファミリーのメンバーであるCCケモカイン受容体1（CCR1）は、自己免疫反応に役割を果たしています。CCR1の特定の小分子阻害剤であるBX471の影響は、軟骨におけるCCR1発現に対するCCR1の発現とOAへのその影響は露出していないままです。 方法：この研究では、免疫組織化学（IHC）を使用して、IL-1β誘発マウス軟骨細胞におけるCCR1発現と、内側メニスカス（DMM）の不安定化の内側メニスカスマウスモデルを評価しました。さまざまな濃度のBX471で24時間処理した軟骨細胞に、IL-1β（10 ng/mL）治療を受けました。加齢に関連した遺伝子P16Ink4aおよびP21CIP1のレベルをウエスタンブロッティングを介して分析し、老化関連β-ガラクトシダーゼ（SA-β-GAL）活性を測定しました。誘導性一酸化窒素シンターゼ（INOS）、シクロオキシゲナーゼ-2（COX-2）、Aggrecan（AGG）、および転写因子Sox9の発現レベルは、ウエスタンブロッティングとRT QPCRを通じて決定されました。コラーゲンII、マトリックスメタロプロテイナーゼ13（MMP13）、およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体（PPAR）-γ発現は、ウエスタンブロット、RT QPCR、および免疫蛍光を介して分析されました。PPAR-γ阻害条件（GW-9662を使用）での炎症性代謝関連タンパク質に対するBX471の影響を、ウエスタンブロッティングを通じて調べました。MAPKシグナル伝達経路関連分子の発現は、ウエスタンブロッティングを通じて評価されました。in vivoでは、さまざまな濃度のBX471または同等の培地をDMMモデルジョイントに注入しました。軟骨の破壊は、サフラニンO/高速緑とヘマトキシリン - エオシン（H＆E）染色を介して評価されました。 結果：この研究では、CCR1がIL-1β誘発老化を緩和し、INOS、COX-2、およびMMP13の発現をダウンレギュレートし、同化指数におけるIL-1β誘導の減少を緩和することが明らかになりました。機械的には、MAPKシグナル伝達経路とPPAR-γは、軟骨細胞に対するCCR1の保護効果の阻害に関与している可能性があります。in vivoでは、BX471はDMMモデルで軟骨を保護しました。 結論：この研究は、軟骨細胞におけるCCR1の発現を実証しました。CCR1を阻害すると、MAPKシグナル伝達経路とPPAR-γを介して炎症反応を減らし、軟骨の老化を軽減し、遅延を遅らせ、OAの潜在的な治療価値を示唆しました。

BACKGROUND: Osteoarthritis (OA) is a degenerative joint disease characterized by cartilage destruction and inflammation. CC chemokine receptor 1 (CCR1), a member of the chemokine family and its receptor family, plays a role in the autoimmune response. The impact of BX471, a specific small molecule inhibitor of CCR1, on CCR1 expression in cartilage and its effects on OA remain underexplored. METHODS: This study used immunohistochemistry (IHC) to assess CCR1 expression in IL-1β-induced mouse chondrocytes and a medial meniscus mouse model of destabilization of the medial meniscus (DMM). Chondrocytes treated with varying concentrations of BX471 for 24 h were subjected to IL-1β (10 ng/ml) treatment. The levels of the aging-related genes P16INK4a and P21CIP1 were analyzed via western blotting, and senescence-associated β-galactosidase (SA-β-gal) activity was measured. The expression levels of inducible nitric oxide synthase (iNOS), cyclooxygenase-2 (COX-2), aggrecan (AGG), and the transcription factor SOX9 were determined through western blotting and RT‒qPCR. Collagen II, matrix metalloproteinase 13 (MMP13), and peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR)-γ expression was analyzed via western blot, RT‒qPCR, and immunofluorescence. The impact of BX471 on inflammatory metabolism-related proteins under PPAR-γ inhibition conditions (using GW-9662) was examined through western blotting. The expression of MAPK signaling pathway-related molecules was assessed through western blotting. In vivo, various concentrations of BX471 or an equivalent medium were injected into DMM model joints. Cartilage destruction was evaluated through Safranin O/Fast green and hematoxylin-eosin (H&E) staining. RESULTS: This study revealed that inhibiting CCR1 mitigates IL-1β-induced aging, downregulates the expression of iNOS, COX-2, and MMP13, and alleviates the IL-1β-induced decrease in anabolic indices. Mechanistically, the MAPK signaling pathway and PPAR-γ may be involved in inhibiting the protective effect of CCR1 on chondrocytes. In vivo, BX471 protected cartilage in a DMM model. CONCLUSION: This study demonstrated the expression of CCR1 in chondrocytes. Inhibiting CCR1 reduced the inflammatory response, alleviated cartilage aging, and retarded degeneration through the MAPK signaling pathway and PPAR-γ, suggesting its potential therapeutic value for OA.