ポリアクリルアミドゲルからニトロセルロースシートへのタンパク質の電気泳動移動：手順といくつかの用途

ポリアクリルアミドゲルからニトロセルロースシートへのタンパク質の電気泳動移動の方法が考案されました。この方法は、尿素を含むゲルからのリボソームタンパク質の定量的移動をもたらします。ドデシル硫酸ナトリウムのゲルの場合、元のバンドパターンは解像度を失うことなく得られましたが、移動は定量的ではありませんでした。この方法により、オートラジオグラフィーによるタンパク質の検出が許可されており、従来の手順よりも簡単です。固定化されたタンパク質は、免疫学的処置によって検出可能でした。ニトロセルロースのすべての追加結合能力は、過剰なタンパク質でブロックされました。次に、特定の抗体が結合され、最後に、最初の抗体に対する2番目の抗体が拘束されました。2番目の抗体は、放射性標識またはフルオレセインまたはペルオキシダーゼに結合しました。次に、特定のタンパク質は、それぞれ自己放射線造影、UV光、またはそれぞれペルオキシダーゼ反応産物のいずれかによって検出されました。後者の場合、わずか100 pgのタンパク質が明らかに検出可能でした。この手順は、特定の反応またはリガンドを持つさまざまなタンパク質の分析に適用できると予想されます。

A method has been devised for the electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets. The method results in quantitative transfer of ribosomal proteins from gels containing urea. For sodium dodecyl sulfate gels, the original band pattern was obtained with no loss of resolution, but the transfer was not quantitative. The method allows detection of proteins by autoradiography and is simpler than conventional procedures. The immobilized proteins were detectable by immunological procedures. All additional binding capacity on the nitrocellulose was blocked with excess protein; then a specific antibody was bound and, finally, a second antibody directed against the first antibody. The second antibody was either radioactively labeled or conjugated to fluorescein or to peroxidase. The specific protein was then detected by either autoradiography, under UV light, or by the peroxidase reaction product, respectively. In the latter case, as little as 100 pg of protein was clearly detectable. It is anticipated that the procedure will be applicable to analysis of a wide variety of proteins with specific reactions or ligands.