Saccharomyces cerevisiaeにおける大腸菌ダムメチラーゼの発現：遺伝的組換えと突然変異に対するin vivoアデニンメチル化の効果

大腸菌DNAアデニンメチラーゼ（DAM）遺伝子は、酵母-EでSaccharomyces cerevisiaeに導入されています。大腸菌シャトルベクトル。SAU3AI、MBOI、およびDPNI制限酵素消化および南部のハイブリダイゼーション分析は、DAM遺伝子が酵母細胞で発現し、GATC配列をメチル化することを示しました。総ゲノムDNAのダイジェストの分析により、一部のGATC部位はメチル化に敏感ではないことが示されました。メチル化の失敗は、染色体構造によるメチラーゼのアクセス不能を反映している可能性があります。in vivoメチル化が有糸分裂細胞の組換えと突然変異のプロセスに及ぼす影響を測定しました。有糸分裂組換えの頻度で、小さなが明確な一般的な増加が見つかりました。いくつかの補助栄養マーカーの復帰についても同様の増加が観察されました。他のマーカーは、突然変異頻度のわずかな減少を示しました。突然変異への影響は、遺伝子座（または対立遺伝子）特異的であるように見えます。減数分裂細胞の組換えが測定され、GATC配列に6-メチルアデニンの存在によって検出されなかった。

The Escherichia coli DNA adenine methylase (dam) gene has been introduced into Saccharomyces cerevisiae on a yeast-E. coli shuttle vector. Sau3AI, MboI, and DpnI restriction enzyme digests and Southern hybridization analysis indicated that the dam gene is expressed in yeast cells and methylates GATC sequences. Analysis of digests of total genomic DNA indicated that some GATC sites are not sensitive to methylation. The failure to methylate may reflect an inaccessibility to the methylase due to chromosome structure. The effects of this in vivo methylation on the processes of recombination and mutation in mitotic cells were determined. A small but definite general increase was found in the frequency of mitotic recombination. A similar increase was observed for reversion of some auxotrophic markers; other markers demonstrated a small decrease in mutation frequency. The effects on mutation appear to be locus (or allele) specific. Recombination in meiotic cells was measured and was not detectably altered by the presence of 6-methyladenine in GATC sequences.