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ペプチドは、診断、治療薬、および抗菌薬として使用されます。ほとんどのペプチドは化学合成によって生成されますが、再結合産生は最近、高力価、毒性の低い廃棄物、三次構造の正しい折りたたみの利点のために魅力的な代替手段になりました。ソマトスタチン-28は、内分泌系を調節し、細胞増殖を調節し、人体に多数の二次ホルモンの放出を阻害するペプチドホルモンです。28のアミノ酸で構成され、1つのジスルフィド結合があり、下流の精製プロセス全体の最適なモデルペプチドになります。組換えタンパク質の高い可溶性発現を可能にし、円形順順に並べ替えられたカスパーゼ-2で融合タグを切断するアフィニティ融合技術システムであるCaspon™テクノロジーを使用して、大腸菌のペプチドを大腸菌のペプチドに生成しました。さらに、製品の浄化は、確立されたプラットフォームプロセスを使用して簡単です。抽出援助としての塩酸またはポリエチレンイミンのいずれかから始まる、下流の精製の2つの異なるケーススタディが提示されています。大腸菌のペリプラズムからアフィニティタグ付きソマトスタチン-28が放出された後、いくつかの精製ステップが実行され、最終的な研磨段階の後に純粋なペプチド溶液を供給しました。このプロセスは、逆位相高速液体クロマトグラフィーと質量分析によって監視され、収率と正しいジスルフィド結合形成を決定しました。各下流ユニットの後の宿主細胞タンパク質、DNA、エンドトキシンなどの不純物の監視により、両方の精製経路の効果的な除去が確認されました。
ペプチドは、診断、治療薬、および抗菌薬として使用されます。ほとんどのペプチドは化学合成によって生成されますが、再結合産生は最近、高力価、毒性の低い廃棄物、三次構造の正しい折りたたみの利点のために魅力的な代替手段になりました。ソマトスタチン-28は、内分泌系を調節し、細胞増殖を調節し、人体に多数の二次ホルモンの放出を阻害するペプチドホルモンです。28のアミノ酸で構成され、1つのジスルフィド結合があり、下流の精製プロセス全体の最適なモデルペプチドになります。組換えタンパク質の高い可溶性発現を可能にし、円形順順に並べ替えられたカスパーゼ-2で融合タグを切断するアフィニティ融合技術システムであるCaspon™テクノロジーを使用して、大腸菌のペプチドを大腸菌のペプチドに生成しました。さらに、製品の浄化は、確立されたプラットフォームプロセスを使用して簡単です。抽出援助としての塩酸またはポリエチレンイミンのいずれかから始まる、下流の精製の2つの異なるケーススタディが提示されています。大腸菌のペリプラズムからアフィニティタグ付きソマトスタチン-28が放出された後、いくつかの精製ステップが実行され、最終的な研磨段階の後に純粋なペプチド溶液を供給しました。このプロセスは、逆位相高速液体クロマトグラフィーと質量分析によって監視され、収率と正しいジスルフィド結合形成を決定しました。各下流ユニットの後の宿主細胞タンパク質、DNA、エンドトキシンなどの不純物の監視により、両方の精製経路の効果的な除去が確認されました。
Peptides are used for diagnostics, therapeutics, and as antimicrobial agents. Most peptides are produced by chemical synthesis, but recombinant production has recently become an attractive alternative due to the advantages of high titers, less toxic waste and correct folding of tertiary structure. Somatostatin-28 is a peptide hormone that regulates the endocrine system, cell proliferation and inhibits the release of numerous secondary hormones in human body. It is composed of 28 amino acids and has one disulfide bond, which makes it to an optimal model peptide for a whole downstream purification process. We produced the peptide in the periplasm of E. coli using the CASPON™ technology, an affinity fusion technology system that enables high soluble expression of recombinant proteins and cleaves the fusion tag with a circularly permuted human caspase-2. Furthermore, purification of the products is straight forward using an established platform process. Two different case studies for downstream purification are presented, starting with either hydrochloric acid or polyethyleneimine as an extraction aid. After release of affinity-tagged somatostatin-28 out of E. coli's periplasm, several purification steps were performed, delivering a pure peptide solution after the final polishing step. The process was monitored by reversed-phase high-performance liquid chromatography as well as mass spectrometry to determine the yield and correct disulfide bond formation. Monitoring of impurities like host cell proteins, DNA and endotoxins after each downstream unit confirmed effective removal for both purification pathways.
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