HL-60由来の好中球による好中球外細胞トラップ形成に対するレスベラトロール、カテキン、およびそれらのコンフォメーション的に拘束された類似体の抑制効果

好中球細胞外トラップ（NET）形成は、好中球のユニークな自己防衛メカニズムです。しかし、アテローム性動脈硬化症を含む多くの疾患にも関与しています。レスベラトロールとカテキンは、抗アテローム性動脈硬化性の抗酸化物質です。ここでは、ネット形成に対するレスベラトロール、カテキン、およびその他の関連化合物の効果を調べました。HL-60由来の好中球は、ホルボール - ミリステートアセテート（PMA）による刺激の前に、レスベラトロールおよび他の化合物で前処理されました。好中球から放出されたDNAおよびミエロペルオキシダーゼが測定されました。レスベラトロールは、用量依存的に好中球からのDNA放出を抑制しました。正味形成は、酸化リン脂質の切り捨てられた形態である1-パルミトイル-2-オキソバレレロイルホスファチジルコリン（POVPC）によって強化され、POVPCおよびPMAによって誘導されるレスベラトロールが抑制されました。さらに、芳香環の自由回転の阻害によって立体構造が制限されたレスベラトロールまたはカテキンのいくつかの類似体を設計しました。立体構造に制約された類似体は、正味形成の阻害においてより効果的でした。しかし、化合物が大きくて疎水性の類似体である場合、それらの阻害機能は減少しました。最も強力な化合物である平面カテキンとレスベラトロールは、活性化好中球からのミエロペルオキシダーゼ放出を抑制しました。さらに、これらの化合物は、カルシウムイオノフォアで刺激された好中球からのDNA放出を抑制しました。これらの結果は、レスベラトロール、カテキン、およびそのアナログがアンチネット効果を発揮し、これらの化合物のジオメトリを制約することで阻害効果が向上したことを示唆しています。

Neutrophil extracellular trap (NET) formation is a unique self-defense mechanism of neutrophils; however, it is also involved in many diseases, including atherosclerosis. Resveratrol and catechin are antioxidants with anti-atherosclerotic properties. Here, we examined the effects of resveratrol, catechin, and other related compounds on NET formation. HL-60-derived neutrophils were pretreated with resveratrol and other compounds before stimulation with phorbol-myristate acetate (PMA). DNA and myeloperoxidase released from neutrophils were determined. Resveratrol suppressed the DNA release from neutrophils in a dose-dependent manner. NET formation was enhanced by 1-palmitoyl-2-oxovaleroyl phosphatidylcholine (POVPC), a truncated form of oxidized phospholipid, and resveratrol suppressed NET formation induced by POVPC and PMA. Furthermore, we designed several analogs of resveratrol or catechin whose conformation was restricted by the inhibition of the free rotation of aromatic rings. The conformationally constrained analogs were more effective at inhibiting NET formation; however, their inhibitory function decreased when compound was a large, hydrophobic analog. The most potent compounds, planar catechin and resveratrol, suppressed myeloperoxidase release from activated neutrophils. In addition, these compounds suppressed DNA release from neutrophils stimulated with calcium ionophore. These results suggest that resveratrol, catechin and their analogs exert anti-NET effects, and that constraining the geometry of these compounds enhanced their inhibitory effects.