エプスタインバーウイルスタンパク質EBNA-LPは、ロイシンリッチモチーフを介してYY1に関与し、ナイーブB細胞変換を促進します

エプスタインバーウイルス（EBV）は、B細胞リンパ腫を含む多くの癌に関連しています。in vitroでは、EBVは原発性B細胞を不死化リンパ芽球細胞株（LCL）に変換し、EBV悪性腫瘍におけるウイルスタンパク質の役割を研究するモデルとして機能します。EBV誘導細胞形質転換は、EBV核抗原（EBNA）を含むウイルスタンパク質によって駆動されます。EBNA-LPは、メモリBセルではなく、ナイーブの変換に重要です。EBNA-LPはEBNA2による遺伝子活性化を促進すると考えられていましたが、EBNA-LPノックアウト（LPKO）ウイルス感染細胞はEBNA2活性化細胞遺伝子を効率的に発現します。したがって、EBNA-LPがナイーブB細胞変換にどのような役割を果たすかについて、知識のギャップが存在します。野生型EBNA-LPを使用したトランスフェクトを救助するトランス補完アッセイを開発しました。EBNA-LPリン酸化部位は、EBNA2の共活性化において重要です。ホスホ変異体もホスホ系EBNA-LPも、ナイーブB細胞の成長を救うことに欠陥はありませんでした。ただし、成体ナイーブおよび臍帯血B細胞の変換に必要なEBNA-LPで保存されたロイシンリッチモチーフを特定しました。細胞PPAR-Gコアクチベーター（PGC）タンパク質は、ロイシンリッチモチーフを使用して、DNAルーピングと代謝の重要な調節因子であるYY1を含む転写因子を関与させるため、転写因子の関与におけるEBNA-LPの役割を調べました。ChIP-seqデータでEBNA-LPとYY1の間に有意なオーバーラップが見つかりました。Cut＆Runにより、LPKO LCLと比較してWTに固有のYY1ピークは、より高度に発現した遺伝子で発生します。さらに、EBV感染の前の一次B細胞におけるYy1のCas9ノックアウトは、YY1がEBVを介した形質転換に重要であると起訴しました。内因性共免疫沈降により、LCLSのEBNA-LPおよびYY1生化学的関連を確認し、LCLでのYY1相互作用にEBNA-LPロイシンリッチモチーフが必要であることを発見しました。EBNA-LPは、保存されたロイシンリッチモチーフを介してYY1に関与し、ナイーブB細胞のEBV変換を促進することを提案します。

Epstein-Barr Virus (EBV) is associated with numerous cancers including B cell lymphomas. In vitro, EBV transforms primary B cells into immortalized Lymphoblastoid Cell Lines (LCLs) which serves as a model to study the role of viral proteins in EBV malignancies. EBV induced cellular transformation is driven by viral proteins including EBV-Nuclear Antigens (EBNAs). EBNA-LP is important for the transformation of naïve but not memory B cells. While EBNA-LP was thought to promote gene activation by EBNA2, EBNA-LP Knockout (LPKO) virus-infected cells express EBNA2-activated cellular genes efficiently. Therefore, a gap in knowledge exists as to what roles EBNA-LP plays in naïve B cell transformation. We developed a trans-complementation assay wherein transfection with wild-type EBNA-LP rescues the transformation of peripheral blood- and cord blood-derived naïve B cells by LPKO virus. Despite EBNA-LP phosphorylation sites being important in EBNA2 co-activation; neither phospho-mutant nor phospho-mimetic EBNA-LP was defective in rescuing naïve B cell outgrowth. However, we identified conserved leucine-rich motifs in EBNA-LP that were required for transformation of adult naïve and cord blood B cells. Because cellular PPAR-g coactivator (PGC) proteins use leucine-rich motifs to engage transcription factors including YY1, a key regulator of DNA looping and metabolism, we examined the role of EBNA-LP in engaging transcription factors. We found a significant overlap between EBNA-LP and YY1 in ChIP-Seq data. By Cut&Run, YY1 peaks unique to WT compared to LPKO LCLs occur at more highly expressed genes. Moreover, Cas9 knockout of YY1 in primary B cells prior to EBV infection indicted YY1 to be important for EBV-mediated transformation. We confirmed EBNA-LP and YY1 biochemical association in LCLs by endogenous co-immunoprecipitation and found that the EBNA-LP leucine-rich motifs were required for YY1 interaction in LCLs. We propose that EBNA-LP engages YY1 through conserved leucine-rich motifs to promote EBV transformation of naïve B cells.