ヒト肝細胞と高解像度質量分析を使用して、強力なチエノ - トリアゾロジアゼピンであるフルブロティゾラムの代謝を探る

背景：精神活性物質の乱用は、臨床および法医学毒物学の課題を提示します。特に頻繁な虐待者やユーザーに成分に気づかない頻繁な健康リスクをもたらす新規および強力な薬物の出現は、状況をさらに複雑にします。デザイナーのベンゾジアゼピンは、これらの新しい精神活性物質（NPS）の急速に成長するサブグループになり、特に他の中枢神経系の抑うつ剤と組み合わせると、潜在的に致命的になる可能性があります。2021年、強力なチエノトリアゾロデザイナーのベンゾジアゼピンであるFlubrotizolamは、「研究化学物質」としてオンラインで入手できる違法市場で登場しました。この設計者のベンゾジアゼピンの消費マーカーの特定は、特に臨床および法医学の症例では、分析毒性学に不可欠です。 方法：したがって、液体クロマトグラフィーの高解像度質量分析とソフトウェア支援データマイニングをインシリコ予測ツールにサポートする液体クロマトグラフィーの高解像度のデータマイニングを適用して、10ドナー調節されたヒト肝細胞におけるフルブロチゾラム摂取のバイオマーカーを特定することを目的としました。 結果：予測研究により、それぞれ10および13の第1世代および第2世代および第2世代の代謝物が生じ、主にヒドロキシル化と硫酸化、メチル化、グルクロン酸拡張反応を通じて形質転換されました。3時間のヒト肝細胞インキュベーション後に6つの代謝物を特定しました。2つのヒドロキシル化代謝物（α-および6-ヒドロキシフルブロチゾラム）、2つの6-ヒドロキシ - グ​​ルクロニド、還元ヒドロキシ-N-グルクロニド、およびN-グルクロニド。 結論：生物学的サンプルのグルクロニド加水分解後の消費マーカーとして、フラブロチゾラムとそのヒドロキシル化代謝物を検出することをお勧めします。結果は、医学的に使用されたベンゾジアゼピン、およびフルブロチゾラムのクロロ - フェニル類似体であるブロティゾラムのin vivo代謝と一致しています。

BACKGROUND: The abuse of psychoactive substances presents challenges in clinical and forensic toxicology. The emergence of novel and potent drugs that pose significant health risks, in particular towards frequent abusers and users unaware of the ingredients, further complicates the situation. Designer benzodiazepines have become a fast-growing subgroup of these new psychoactive substances (NPSs), and their overdose may potentially turn fatal, especially when combined with other central nervous system depressants. In 2021, flubrotizolam, a potent thieno-triazolo designer benzodiazepine, emerged on the illicit market, available online as a "research chemical". The identification of markers of consumption for this designer benzodiazepine is essential in analytical toxicology, especially in clinical and forensic cases. METHODS: We therefore aimed to identify biomarkers of flubrotizolam uptake in ten-donor-pooled human hepatocytes, applying liquid chromatography high-resolution mass spectrometry and software-aided data mining supported by in silico prediction tools. RESULTS: Prediction studies resulted in 10 and 13 first- and second-generation metabolites, respectively, mainly transformed through hydroxylation and sulfation, methylation, and glucuronidation reactions. We identified six metabolites after 3 h human hepatocyte incubation: two hydroxylated metabolites (α- and 6-hydroxy-flubrotizolam), two 6-hydroxy-glucuronides, a reduced-hydroxy-N-glucuronide, and an N-glucuronide. CONCLUSIONS: We suggest detecting flubrotizolam and its hydroxylated metabolites as markers of consumption after the glucuronide hydrolysis of biological samples. The results are consistent with the in vivo metabolism of brotizolam, a medically used benzodiazepine and a chloro-phenyl analog of flubrotizolam.