フィブリナロイド微小細胞におけるアミロイド形成クロスシードのプロテオミクスの証拠

古典的なアミロイド症では、タンパク質モノマーの核形成と降着を介してアミロイド繊維が形成され、プロトクリルとフィブリルは、繊維方向に垂直に並んだ平行または逆平行βシートのクロスβモチーフを示します。これらのプロトフィブリルとフィブリルは絡み合って成熟したアミロイド繊維を形成することができます。同様の現象は、循環炎症分子（およびウイルスや細菌に由来するもの）を循環する個人からの血液中に発生する可能性があります。このような病理学的凝固は、フィブリナロイド微小岩と呼ばれる異常なアミロイド型をもたらす可能性があります。これらのマイクロクロットの以前のプロテオーム解析により、非フィブリン（OGEN）タンパク質の存在が示されており、単純な閉じ込めよりも複雑なメカニズムを示唆しています。したがって、このような単純な閉じ込めモデルに対する証拠を提供し、凝血孔が大きすぎて遠心分離が弱く結合したタンパク質を除去したことに注意してください。代わりに、アミロイド繊維への凝集が軸方向（同じフィブリル内の複数のタンパク質）、横方向（繊維に寄与する単一タンパク質フィブリル）、または両方のタイプの統合を含むかどうかを調査します。異なる疾患におけるフィブリナロイドマイクロクロットからのプロテオミクスデータの分析は、正常な血漿プロテオームと有意な定量的オーバーラップを示しておらず、血漿タンパク質の存在量とフィブリナイドの微小細胞におけるそれらの存在との間に相関関係がないことを示しています。特に、α-2-マクログロブリン、フィブロネクチン、トランスシレチンなどの豊富な血漿タンパク質はマイクロクロットには存在しませんが、アディポネクチン、ペリオスチン、フォンウィルブランド因子などの豊富なタンパク質はよく表されています。アミログラムやアヌップを含むバイオインフォマティックツールを使用して、フィブリナロイドミクロットに閉じ込められたタンパク質が高いアミロイド形成傾向を示すことを発見し、アミロイド構造へのクロスβ要素としての統合を示唆しています。この統合は、タンパク質分解に対するマイクロクロットの抵抗に寄与する可能性があります。我々の発見は、線維性ミクロット形成におけるクロスシードの役割を強調し、血栓症およびアミロイド疾患における構造的特性と意味をさらに調査する必要性を強調しています。これらの洞察は、血液凝固障害におけるアミロイド形成クロスシードを対象とした新しい診断および治療戦略を開発するための基盤を提供します。

In classical amyloidoses, amyloid fibres form through the nucleation and accretion of protein monomers, with protofibrils and fibrils exhibiting a cross-β motif of parallel or antiparallel β-sheets oriented perpendicular to the fibre direction. These protofibrils and fibrils can intertwine to form mature amyloid fibres. Similar phenomena can occur in blood from individuals with circulating inflammatory molecules (and also some originating from viruses and bacteria). Such pathological clotting can result in an anomalous amyloid form termed fibrinaloid microclots. Previous proteomic analyses of these microclots have shown the presence of non-fibrin(ogen) proteins, suggesting a more complex mechanism than simple entrapment. We thus provide evidence against such a simple entrapment model, noting that clot pores are too large and centrifugation would have removed weakly bound proteins. Instead, we explore whether co-aggregation into amyloid fibres may involve axial (multiple proteins within the same fibril), lateral (single-protein fibrils contributing to a fibre), or both types of integration. Our analysis of proteomic data from fibrinaloid microclots in different diseases shows no significant quantitative overlap with the normal plasma proteome and no correlation between plasma protein abundance and their presence in fibrinaloid microclots. Notably, abundant plasma proteins like α-2-macroglobulin, fibronectin, and transthyretin are absent from microclots, while less abundant proteins such as adiponectin, periostin, and von Willebrand factor are well represented. Using bioinformatic tools, including AmyloGram and AnuPP, we found that proteins entrapped in fibrinaloid microclots exhibit high amyloidogenic tendencies, suggesting their integration as cross-β elements into amyloid structures. This integration likely contributes to the microclots' resistance to proteolysis. Our findings underscore the role of cross-seeding in fibrinaloid microclot formation and highlight the need for further investigation into their structural properties and implications in thrombotic and amyloid diseases. These insights provide a foundation for developing novel diagnostic and therapeutic strategies targeting amyloidogenic cross-seeding in blood clotting disorders.