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グルタチオンの決定に関与するさまざまな反応の速度論的パラメーターの評価は、頻繁に使用されるアッセイの修正の理論的根拠を提供しました（F. Tietze、1969、Anal。Biochem。27、502-522）。pH 6.0では、エルマンの試薬による還元グルタチオン（GSH）の非酵素チオールインターチェンジ反応は速度の制限になり、グルタチオン還元酵素の50％までの阻害は測定の精度に影響を与えません。感度の低レベルは10（-10）モルグルタチオンで、最大5 x 10（-9）molの線形応答があります。グルタチオンジスルフィドの測定のために、GSHはN-エチルマレイミド（NEM）によってアルキル化され、過剰なNEMは酢酸エチルで抽出することにより除去されます。グルタチオン付加物は安定していないため、抽出されたサンプルは分析の前に深く凍結しています。この予防措置を使用して、GSSGの0.05％未満がGSSGから以前に解放されていたGSH含有サンプルで決定されました。
グルタチオンの決定に関与するさまざまな反応の速度論的パラメーターの評価は、頻繁に使用されるアッセイの修正の理論的根拠を提供しました（F. Tietze、1969、Anal。Biochem。27、502-522）。pH 6.0では、エルマンの試薬による還元グルタチオン（GSH）の非酵素チオールインターチェンジ反応は速度の制限になり、グルタチオン還元酵素の50％までの阻害は測定の精度に影響を与えません。感度の低レベルは10（-10）モルグルタチオンで、最大5 x 10（-9）molの線形応答があります。グルタチオンジスルフィドの測定のために、GSHはN-エチルマレイミド（NEM）によってアルキル化され、過剰なNEMは酢酸エチルで抽出することにより除去されます。グルタチオン付加物は安定していないため、抽出されたサンプルは分析の前に深く凍結しています。この予防措置を使用して、GSSGの0.05％未満がGSSGから以前に解放されていたGSH含有サンプルで決定されました。
Evaluation of the kinetic parameters of the various reactions involved in the determination of glutathione provided the rationale for a modification of the frequently used assay (F. Tietze, 1969, Anal. Biochem. 27, 502-522) whereby the enzymatic reaction is no longer rate limiting. At pH 6.0, the nonenzymatic thiol interchange reaction of reduced glutathione (GSH) with Ellman's reagent becomes rate limiting, and inhibition of glutathione reductase up to 50% has no influence on the accuracy of the determination. The lower level of sensitivity is 10(-10) mol glutathione with a linear response up to 5 X 10(-9) mol. For determination of glutathione disulfide, GSH is alkylated by N-ethylmaleimide (NEM), and excess NEM is removed by extraction with ethyl acetate. Since the glutathione adduct is not stable, extracted samples are kept deep-frozen prior to analysis. Using this precaution, less than 0.05% of GSSG was determined in GSH-containing samples which had been previously freed from GSSG.
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