腹水細胞抽出物におけるピコナウイルスタンパク質合成の開始

ピコナウイルスタンパク質形成の現在のモデルは、タンパク質合成の開始がウイルスRNA上の単一の部位で発生し、形成された大きなポリペプチドが後に切断されることを意味します。このモデルの直接検査は、ウサギ肝臓met-trNA（m）（met）およびfmet-trNA（f）（met）からの[（35）s]メチオニンの脳脊準筋腫炎ウイルス筋膜筋膜炎タンパク質へのエリリッヒ吸着細胞の抽出物での取り込みを研究することにより、in vitroで行われました。N-ホルミルメチオニンの取り込みは5分以内に完了しましたが、Met-TRNA（M）（MET）の利用は20分間継続しました。アニオン交換クロマトグラフィーによって分析されたMet-TRNA（M）（MET）からの[（35）s]メチオニン標識生成物のトリプティック消化により、30個以上のペプチドが生成されました。対照的に、FMET-TRNA（F）（MET）で標識された製品は、1つの主要な（26）S標識トリプティックペプチドを生成しました。このペプチドにおけるメチオニンのN末端位置は、エドマンの分解によって検証されました。マウスエルバーフェルドとメンゴウイルスRNAをメッセンジャーとして使用したとき、1つの主要なN末端トリプシンペプチドもFMET-TRNA（F）（MET）で得られました。製品の内部標識と比較してN末端に基づいて、翻訳後のin vitroではin vitroでの証拠は見つかりませんでした。結果は、ピコナウイルスタンパク質の合成のための単一の開始部位と一致しています。

The current model of picornavirus protein formation implies that initiation of protein synthesis occurs at a single site on the viral RNA, and that the large polypeptide formed is later cleaved. A direct test of this model was made in vitro by studying the incorporation of [(35)S]methionine from rabbit liver Met-tRNA(M) (Met) and fMet-tRNA(F) (Met) into encephalomyocarditis virus RNA-coded proteins in extracts of Ehrlich ascites cells. The incorporation of N-formylmethionine was complete within 5 min, while utilization of Met-tRNA(M) (Met) continued for 20 min. Tryptic digests of [(35)S]methionine-labeled products from Met-tRNA(M) (Met) analyzed by anion-exchange chromatography yielded more than 30 peptides, as compared to about 15 [(35)S]methionine-labeled peptides from purified encephalomyocarditis virus. In contrast, products labeled with fMet-tRNA(F) (Met) yielded one major (26)S-labeled tryptic peptide. The N-terminal location of methionine in this peptide was verified by Edman degradation. One predominant N-terminal tryptic peptide was also obtained with fMet-tRNA(F) (Met) when mouse Elberfeld and mengo-virus RNAs were used as messengers. On the basis of N-terminal compared with internal labeling of the products, no evidence for in vitro post-translational cleavage was found. The results are consistent with a single initiation site for synthesis of picornavirus proteins.