甲状腺ホルモンの作用の細胞培養研究で使用するためのユーチロイド牛血清中のL-3,5,3'-トリオヨードイロニンとL-チロキシンの枯渇

GH1細胞は、GHとPRLを合成するラット下垂体腫瘍細胞のクローン株です。我々は、細胞培養条件下で甲状腺ホルモン枯渇状態を達成するために甲状腺摘出式子牛血清を補充した培地で培養した場合、これらの細胞がL-T3およびL-T4の生理学的濃度に応答することを実証した。この研究では、アニオン交換樹脂を使用して、L-T3およびL-T4の肥大症の子牛血清を枯渇させる方法について説明します。この手順は、血清の低分子量陰イオン成分を最小限に変化させ、総タンパク質含有量または血清タンパク質の電気泳動パターンを変化させないことを実証します。さらに、この手順によりL-T3とL-T4の枯渇した肥大症の子牛血清が血清を生成することを示しています。これは、中程度のサプリメントとして使用すると、甲状腺摘出摘出された子牛血清を補充した培地で得られたものと同一の生物学的反応をもたらすことを示します。さらに、樹脂処理は、甲状腺ホルモン濃度が回復した場合、血清の成長促進特性を変化させません。この手順は、甲状腺切除が不可能な状況で、または多数の小動物の外科的処置を必要とする状況で、細胞培養研究のために甲状腺ホルモン枯渇血清を調製するのに役立つはずです。

GH1 cells are a clonal strain of rat pituitary tumor cells which synthesize GH and PRL. We have previously demonstrated that these cells respond to physiological concentrations of L-T3 and L-T4 when cultured with medium supplemented with thyroidectomized calf serum to achieve a thyroid hormone-depleted state under cell culture conditions. In this study, we describe a method to deplete euthyroid calf serum of L-T3 and L-T4 using an anion exchange resin. We demonstrate that the procedure only minimally alters the low molecular weight anion components of the serum and does not change the total protein content or the electrophoretic pattern of serum proteins. Moreover, we show that euthyroid calf serum depleted of L-T3 and L-T4 by this procedure yields serum which, when used as a medium supplement, results in biological responses identical to those obtained with media supplemented with thyroidectomized calf serum. In addition, resin treatment does not alter the growth-promoting properties of the serum if the thyroid hormone concentration is restored. This procedure should be useful in preparing thyroid hormone-depleted serum for cell culture studies in situations where thyroidectomy is not feasible or would require surgical procedures on a large number of small animals.