トリトンX-100による大腸菌の細胞質膜の可溶化

23 CでトリトンX-100で大腸菌の細胞壁の部分的に精製された調製を処理すると、タンパク質の15〜25％が可溶化されました。電子顕微鏡によるトリトン無溶解材料の検査は、細胞壁の特徴的な形態がトリトン抽出の影響を受けないことを示しました。細胞壁に通常観察された細胞質膜の断片を含む、細胞質膜の汚染断片をTriton X-100によって除去しました。Triton X-100による部分的に精製された細胞質膜画分の治療により、この画分のタンパク質の60〜80％の可溶化が生じました。酸性化ジメチルホルムアミドのゲルろ過によるトリトンの除去後のポリアクリルアミドゲル電気泳動による細胞壁および細胞質膜画分からのトリトン可溶性およびトリトン加溶性タンパク質の比較は、シトラックメンブレンの特異的に溶解化されたプロテクの特異剤が特異的に溶解化されたプロテンであることを示していることが示されました。細胞壁の画分から可溶化されたタンパク質は、細胞質膜画分から可溶化されたものと定性的に同一でしたが、異なる割合で存在していたため、細胞壁に付着している細胞質膜の断片は、残りの部分と組成が異なることを示唆しています。細胞の細胞質膜。トリトンX-100での非分単位のエンベロープ製剤を処理すると、タンパク質の40％が可溶化され、細胞質膜のタンパク質のみが可溶化されました。したがって、トリトンによる抽出は、細胞壁のタンパク質と大腸菌の細胞質膜を分離する迅速かつ特定の手段を提供します。

Treatment of a partially purified preparation of cell walls of Escherichia coli with Triton X-100 at 23 C resulted in a solubilization of 15 to 25% of the protein. Examination of the Triton-insoluble material by electron microscopy indicated that the characteristic morphology of the cell wall was not affected by the Triton extraction. Contaminating fragments of the cytoplasmic membrane were removed by Triton X-100, including the fragments of the cytoplasmic membrane which were normally observed attached to the cell wall. Treatment of a partially purified cytoplasmic membrane fraction with Triton X-100 resulted in the solubilization of 60 to 80% of the protein of this fraction. Comparison of the Triton-soluble and Triton-insoluble proteins from the cell wall and cytoplasmic membrane fractions by polyacrylamide gel electrophoresis after removal of the Triton by gel filtration in acidified dimethyl formamide indicated that the detergent specifically solubilized proteins of the cytoplasmic membrane. The proteins solubilized from the cell wall fraction were qualitatively identical to those solubilized from the cytoplasmic membrane fraction, but were present in different proportions, suggesting that the fragments of cytoplasmic membrane which are attached to the cell wall are different in composition from the remainder of the cytoplasmic membrane of the cell. Treatment of unfractionated envelope preparations with Triton X-100 resulted in the solubilization of 40% of the protein, and only proteins of the cytoplasmic membrane were solubilized. Extraction with Triton thus provides a rapid and specific means of separating the proteins of the cell wall and cytoplasmic membrane of E. coli.