葉からのピルビン酸、リン酸ジキナーゼの特性と作用機序

1.砂糖ケインの葉ピルビン酸、P（I）ディキナーゼには、触媒する反応の化学量論とメカニズムに関する研究を妨害する酵素を備えていませんでした。この反応は、ピルビン酸、ATP、およびP（I）のホスホエノールピルビン酸、AMPおよびPP（I）への等モル量の変換を含むことが明確に示されました。2.精製された酵素は、Mg（2+）の存在下で約20度で保存されている場合にのみ、ph8.3で安定していたため、チオールの酸化を防ぐように注意してください。3.ホスホエノールピルビン酸とPP（I）の見かけのミカエリス定数はそれぞれ0.11mmと0.04mmであり、AMPのそれは4mum未満でした。4. ph8.3では、反応の初期速度は、逆方向のホスホエノールピルビン酸合成に向けて方向に約6倍速かった。5. ATPを除き、両方向の反応のすべての生成物は抑制性でした。6. pp（i）のリン酸塩基は、p（i）およびATPの末端リン酸塩に由来していました。7.同位体交換研究により、反応は次のステップで進行することが示されました：酵素+ATP+P（I）左harの上の右har弾酵素-P+AMP+PP（I）酵素-P+ピルビン酸右har+ホスホエノールピルビン酸

1. Sugar-cane leaf pyruvate,P(i) dikinase was prepared free of enzymes that would interfere with studies on the stoicheiometry and mechanism of the reaction it catalyses. The reaction was unequivocally shown to involve the conversion of equimolar amounts of pyruvate, ATP and P(i) into phosphoenolpyruvate, AMP and PP(i). 2. The purified enzyme was stable at pH8.3 only if stored at about 20 degrees in the presence of Mg(2+) and a thiol-reducing reagent, care being taken to prevent the oxidation of the thiol. 3. The apparent Michaelis constants for phosphoenolpyruvate and PP(i) were 0.11mm and 0.04mm respectively and that for AMP was less than 4mum. 4. At pH8.3 the initial velocity of the reaction was about 6 times as fast in the direction towards phosphoenolpyruvate synthesis as in the reverse direction. 5. With the exception of ATP, all the products of the reaction in both directions were inhibitory. 6. The phosphate groups of PP(i) were derived from P(i) and from the terminal phosphate of ATP. 7. Isotope-exchange studies indicated that the reaction proceeds in the following steps:Enzyme+ATP+P(i) right harpoon over left harpoon Enzyme-P+AMP+PP(i)Enzyme-P+pyruvate right harpoon over left harpoon Enzyme+phosphoenolpyruvate