カテプシンBおよびDによる筋原線維タンパク質の分解

カテプシン B およびカテプシン D は、ラットの肝臓および骨格筋から精製されました。電気泳動分析により、酵素が高度に精製されていることが明らかになり、等電点電気泳動により両方の酵素の複数の形態が実証されました。精製されたアクチンおよびミオシン、ならびに筋フィラメントおよび筋原線維のアクチンおよびミオシンは、精製されたカテプシン B および D によって分解されました。ミオシンの分解は、それぞれカテプシン B および D 阻害剤であるロイペプチンおよびペプスタチンによって完全にブロックされました。カテプシン B および D は、基質として CBZ-Ala-Arg-Arg-4-メトキシ-β-ナフチルアミンおよび BZ-Arg-Gly-Phe-Leu-4-メトキシ-β-ナフチルアミンを使用して、電子顕微鏡によって視覚化されました。

Cathepsin B and cathepsin D were purified from rat liver and skeletal muscle. Electrophoretic analyses revealed that the enzymes were highly purified, and isoelectric focusing demonstrated multiple forms of both enzymes. Purified actin and myosin, as well as actin and myosin in myofilaments and myofibrils, were degraded by the purified cathepsins B and D. Degradation of myosin was completely blocked by the cathepsin B and D inhibitors, leupeptin and pepstatin, respectively. Cathepsins B and D were visualized by electron microscopy, using CBZ-Ala- Arg-Arg-4-methoxy-beta-naphthylamine and BZ-Arg-Gly-Phe-Leu-4-methoxy-beta-naphthylamine as substrates.