5-OH-DOPA、チロシナーゼの産物および基質

マッシュルームチロシナーゼとのチロシンまたはDOPAのインキュベーション時に5-OH-DOPAの形成を研究しました。ドーパオキシダーゼ活性は、過剰な量のシステインの存在下でDOPAから5-sおよび2-s-cysteinyldopaの形成を測定することにより定義されました。ドパキノンの即時の求核反応産物を定量化するこの手順は、チロシナーゼ活性を評価するための新しい方法を構成します。ドーパからの5-OH-DOPA形成の速度は、チロシンからのドーパ形成の速度と類似していた。ドーパキノン層の速度は1桁高かった。アスコルビン酸の存在下でチロシンを酸化した場合、5-OH-DOPA形成は、元のチロシン量の14％を表しています。低濃度のDOPAでは、5-OH-DOPAの形成はDOPA濃度に比例しました。高濃度では、5-OHドーパの相対量が減少しました。高濃度のチロシンは、ドーパから5-OH-DOPAの形成を阻害しました。5-OH-DOPAは、チロシナーゼの基質であることが証明されました。5-OH-DOPAの酸化速度はDOPAの酸化速度と類似していた。5-OHドーパの酸化生成物は、比較的安定したフルオロフォアに変換されました。

The formation of 5-OH-dopa on incubation of tyrosine or dopa with mushroom tyrosinase was studied. Dopa oxidase activity was defined by measuring the formation of 5-S- and 2-S-cysteinyldopa from dopa in the presence of excess amounts of cysteine. This procedure quantitating the immediate nucleophilic reaction products of dopaquinone constitutes a new method for assessing tyrosinase activity. The rate of 5-OH-dopa formation from dopa was similar to that of the formation of dopa from tyrosine. The rate of dopaquinone formation was one order of magnitude higher. When tyrosine was oxidized in the presence of ascorbic acid, 5-OH-dopa formation represented 14% of the original amount of tyrosine. At low concentration of dopa, formation of 5-OH-dopa was proportional to the dopa concentration. At high concentrations the relative quantity of 5-OH-dopa formed decreased. Tyrosine in high concentrations inhibited the formation of 5-OH-dopa from dopa. 5-OH-dopa proved to be a substrate for tyrosinase. The rate of oxidation of 5-OH-dopa was similar to that of dopa. The oxidation products of 5-OH-dopa were transformed into relatively stable fluorophores.