レクチンの適用 - 薄切片での糖凝集体の電子顕微鏡局在のための等型複合体

さまざまな細胞コンパートメントのレクチン結合部位の電子顕微鏡検出と、樹脂包埋組織の薄い切片を使用する細胞外構造の電子顕微鏡検出の方法について説明します。さまざまなレクチン（Ricinus communisレクチンIおよびII、ピーナッツレクチン、ロータステトラゴノロブスレクチン、Ulex europeusレクチンI、レンズキュリナリスレクチン、ヘリックスポマティアレクチン、大豆レクチン）は、コロイド型金の粒子に結合しました。糖タンパク質 - 等輪複合体は、間接的な技術（Concanavalin AおよびHorsaradishペルオキシダーゼ - gold複合体、小麦胚芽レクチンとオボンコイド - ゴールド複合体）で調製され、適用されました。14 nmの金粒子からのそのような複合体の調製の詳細が報告されています。満足のいく染色結果と良好な微細な構造の保存を与えた組織処理の条件は、浸透せずに軽度のアルデヒド固定と、親水性樹脂低リクリルK4Mによる低温埋め込みでした。Lowicryl K4M薄切片の標識の前に、いわゆるエッチング手順はどれも必要ありませんでした。このアプローチの使用の例は、腸のゴブレット細胞の粗い小胞体、ゴルジ体、ムチン、および吸収性腸および腎尿細管細胞のさまざまな細胞内構造と同様に、腸のゴブレット細胞の粗い小胞体、ゴルジ装置、およびムチンを検出します。ラット肝臓におけるコンカナバリンA結合部位の局在化の既存の染色結果と比較が行われます。これは、このような手法で一般的な浸透の問題が、ここで説明されている埋め込み後のアプローチによって回避されることを示しています。コンカナバリンA結合部位は、核エンベロープ、粗く滑らかな小胞体、原形質膜、コラーゲン繊維だけでなく、ミトコンドリア、グリコーゲン、リボソーム、核にも一貫して見られました。これらのデータと以前の調査（Roth J、Cytochem 31：547、1983）のデータは、光および電子顕微鏡による糖凝集物の封入後のこの細胞化学技術の適用可能性を証明しています。

A method is described for the electron microscopic detection of lectin-binding sites in different cellular compartments and extracellular structures that uses thin sections from resin-embedded tissues. Various lectins (Ricinus communis lectin I and II, peanut lectin, Lotus tetragonolobus lectin, Ulex europeus lectin I, Lens culinaris lectin, Helix pomatia lectin, and soybean lectin) were bound to particles of colloidal gold and used for direct staining of thin sections or glycoprotein--gold complexes were prepared and applied in an indirect technique (concanavalin A and horseradish peroxidase--gold complex; wheat germ lectin and ovomucoid--gold complex). The details for preparation of such complexes from 14 nm gold particles are reported. The conditions of tissue processing that gave satisfactory staining results and good fine structure preservation were mild aldehyde fixation without osmification and low temperature embedding with the hydrophilic resin Lowicryl K4M. None of the so-called etching procedures was necessary prior to labeling of Lowicryl K4M thin sections. Examples of the use of this approach for detection of glycoconjugates in the rough endoplasmic reticulum, Golgi apparatus, and mucin of intestinal goblet cells as well as plasma membrane and various intracellular structures of absorptive intestinal and renal tubular cells are shown. A comparison is made with preembedding staining results on Concanavalin A-binding site localization in rat liver which shows that problems of penetration common in such a technique are circumvented by the postembedding approach described here. Concanavalin A-binding sites were not only consistently found in nuclear envelope, rough and smooth endoplasmic reticulum, plasma membranes, and collagen fibers, but also in mitochondria, glycogen, ribosomes, and nucleus. These data and those of a previous investigation (Roth J, Cytochem 31:547, 1983) prove the applicability of this cytochemical technique for postembedding localization of glycoconjugates by light and electron microscopy.