Ad5ジヒドロ葉酸還元酵素組換えウイルスにおけるジヒドロ葉酸レダクターゼおよび隣接するEIB領域の発現

AD2 MLPと最初のリーダー、およびマウスDHFR cDNAクローンの周りに配置された適切なRNA処理シグナル（スプライシング、ポリアデニル化）を備えた遺伝子をAD5のEIA領域に置き換え、AD5（DHFR-I）のウイルスストックを293に調製しました。セル。予想されるサイズと構造のDHFR RNAは、AD5（DHFR-I）による293細胞の感染後、他のAD5後期メッセージに匹敵するレベルで発現しました。このDHFR mRNAは、in vitroで他のAD後期mRNAと同じように効率的に翻訳されましたが、in vivoでの翻訳が不十分でした。AD5 EIA領域のDHFR遺伝子の置換は、隣接するEIB配列に異常な転写活性をもたらします。EIB 1KBメッセージの転写レベルは約10倍減少しました。さらに、PIX開始コドンから上流14 bp上流のAD最初のリーダーのスプライシングによって生成された、新しいPix-Encoding mRNAが生成されました。この新しいmRNAは、in vivoとin vitroの両方で翻訳するのに強力に効率的であることがわかりました。

A gene with the Ad2 MLP and first leader, and appropriate RNA processing signals (splicing, polyadenylation) positioned around a mouse DHFR cDNA clone was substituted for the EIa region of Ad5, and virus stocks of Ad5 (DHFR-I) were prepared on 293 cells. A DHFR RNA of the expected size and structure was expressed late after infection of 293 cells by Ad5 (DHFR-I), at levels comparable to that of other Ad5 late messages. Although this DHFR mRNA was translated as efficiently as other Ad late mRNAs in vitro, it was only poorly translated in vivo. The substitution of the DHFR gene for the Ad5 EIa region results in aberrant transcriptional activity in the adjacent EIb sequences. The transcriptional levels of the EIb 1kb message were down approximately 10-fold. In addition, a novel pIX-encoding mRNA was produced, generated by the splicing of the Ad first late leader onto sequences 14 bp upstream from the pIX initiation codon. This new mRNA was found to be potently efficient for translation both in vivo and in vitro.