ラムダPRMプロモーターからの転写開始の活性化に対するラムダリプレ​​ッサー変異の効果

野生型ラムダリプレ​​ッサーは、開始反応における速度制限異性化ステップを刺激することにより、ラムダPRMプロモーターからの転写を活性化します。Lambda Repressorの陽性コントロール変異体は、通常正常にオペレーターDNAを結合する能力を保持していますが、in vivoでのLambda PRMプロモーターからの転写を活性化できません。私たちはこれらの変異体の1つをin vitroで特徴付け、欠陥の生化学的性質を決定しました。変異抑制因子が、転写開始における異性化ステップを刺激する能力が不足していることを示します。RNAポリメラーゼのPRMへの初期結合は、変異リプレッサーによってわずかに減少しました。また、変異体および野生型リプレッサーは、右方向の演算子の3つの結合部位すべてに同様の親和性を持っていることがわかりました。これらの結果は、PRM活性化メカニズムにおいて、直接抑制-RNAポリメラーゼ相互作用が重要であるという仮説をサポートしています。

Wild-type lambda repressor activates transcription from the lambda PRM promoter by stimulating the rate-limiting isomerization step in the initiation reaction. The positive-control mutants of lambda repressor retain the ability to bind operator DNA normally, but fail to activate transcription from the lambda PRM promoter in vivo. We have characterized one of these mutants in vitro, and have determined the biochemical nature of the defect. We show that the mutant repressor was deficient in its ability to stimulate the isomerization step in transcription initiation. The initial binding of RNA polymerase to PRM was only slightly reduced by the mutant repressor. We also found that the mutant and wild-type repressors had similar affinities for all three binding sites in the rightward operator. These results provide support for the hypothesis that direct repressor-RNA polymerase interactions are important in the PRM activation mechanism.