ヒトC4B結合タンパク質の精製とその複合体のビタミンK依存性タンパク質Sの形成s

C4B結合タンパク質は、クエン酸バリウム吸着とその後の2つのクロマトグラフィーステップを含む単純な手順により、高収量のヒト血漿から精製されました。約おそらく、ビタミンK依存性タンパク質Sとの複雑な形成のため、血漿C4B結合タンパク質の80％がクエン酸バリウムに吸着されました。精製されたC4B結合タンパク質の分子量は570 000でした。約8つのサブユニットで構成されていました（MR約70 000）。複製されていない血漿C4B結合タンパク質は、クエン酸バリウム吸着後の上清から精製されました。非還元条件でのドデシル硫酸ナトリウム/ポリアクリルアミドゲル電気泳動およびアガロースゲル電気泳動では、ダブレットとして現れ、分子量と正味電荷で互いにわずかに異なる2つの形態を示しています。ダブレットの高分子量を持つタンパク質バンドは、クエン酸バリウム溶液から精製されたC4B結合タンパク質に対応していました。タンパク質SとC4B結合タンパク質の複雑な形成は、血漿および精製成分を備えたシステムで、アガロースゲル電気泳動技術によって研究されました。タンパク質Sは、C4B結合タンパク質のより高い分子量型の1：1複合体を形成することがわかったのに対し、C4B結合タンパク質の低分子量型はタンパク質Sに結合しませんでした。精製成分を備えたシステムでの結合タンパク質 - タンパク質S相互作用は約でした。0.9 x 10（-7）M。37度Cでの関連性と解離の速度は低く、つまり約1 x 10（3）m-1でした。S-1および1.8 x 10（-4）-4.5 x 10（-4）S-1。ヒト血漿フリータンパク質Sおよび遊離高等量C4B結合タンパク質は、C4B結合タンパク質間 - タンパク質S複合体と平衡状態にありました。約両方のタンパク質の40％が遊離タンパク質として存在していました。血漿中の平衡データから、C4B結合タンパク質 - タンパク質S相互作用について、約0.7 x 10（-7）mのkdが計算されました。

C4b-binding protein was purified from human plasma in high yield by a simple procedure involving barium citrate adsorption and two subsequent chromatographic steps. Approx. 80% of plasma C4b-binding protein was adsorbed on the barium citrate, presumably because of its complex-formation with vitamin K-dependent protein S. The purified C4b-binding protein had a molecular weight of 570 000, as determined by ultracentrifugation, and was composed of about eight subunits (Mr approx. 70 000). Uncomplexed plasma C4b-binding protein was purified from the supernatant after barium citrate adsorption. On sodium dodecyl sulphate/polyacrylamide-gel electrophoresis in non-reducing conditions and on agarose-gel electrophoresis it appeared as a doublet, indicating two forms differing slightly from each other in molecular weight and net charge. The protein band with the higher molecular weight in the doublet corresponded to the C4b-binding protein purified from the barium citrate eluate. Complex-formation between protein S and C4b-binding protein was studied in plasma, and in a system with purified components, by an agarose-gel electrophoresis technique. Protein S was found to form a 1:1 complex with the higher-molecular-weight form of C4b-binding protein, whereas the lower-molecular-weight form of C4b-binding protein did not bind protein S. The KD for the C4b-binding protein-protein S interaction in a system with purified components was approx. 0.9 X 10(-7) M. Rates of association and dissociation at 37 degrees C were low, namely about 1 X 10(3) M-1 . S-1 and 1.8 X 10(-4)-4.5 X 10(-4) S-1 respectively. In human plasma free protein S and free higher-molecular-weight C4b-binding protein were in equilibrium with the C4b-binding protein-protein S complex. Approx. 40% of both proteins existed as free proteins. From equilibrium data in plasma a KD of about 0.7 X 10(-7) M was calculated for the C4b-binding protein-protein S interaction.