デオキシリボヌクレ酸損傷ネオカルジノスタチン発色団：デオキシリボースのC-5 'の選択的酸化によって生成される鎖切断

ネオカルジノスタチン発色団によってDNAで誘導された病変の中には、自発的およびアルカリ依存性塩基放出、糖の損傷、および3 '末端にリン酸（PO4）を伴う一本鎖切断、および5'末端にPO4またはヌクレオシド5'-アルデヒドがあります。薬物カットDNAにおける5'末端チミジン5'-アデヒドのアルカリ依存性チミンの放出と分解を測定することにより、速度論は各プロセスで同じであり、ヌクレオシドアルデヒドが約85％のソースであることを示します。アルカリ依存性チミン放出。5'-アルデヒドの末端を5'-ヒドロキシルに還元し、続いてポリヌクレオチドキナーゼによる[ガンマ-32p] ATPから32pを組み込んで、選択的定量を可能にします。ヌクレオシド5'-アルデヒドSOは、薬物生成された5 '末端の80％以上を説明します。残りにはPO4 Terminiがあります。これらの手法には、PO4端の測定におけるアルカリラビル部位の寄与も含まれているため、DNAシーケンスを使用して端を直接測定しました。3'-32p末端標識DNA制限断片を薬物の基質として使用すると、Tでの薬物攻撃は主に2つのバンドをもたらすことがわかりました。特定の休憩の90％以上を説明します。その構造は、シーケンスゲルからの分離と、さまざまな化学および酵素治療によって検証されました。いずれの場合も、ゲル上の製品の移動度は予測可能な方法で変更されました。自発的な休憩に加えて、ネオカルジノスタチンは、T残基でアルカリの湿気を優先的に引き起こします。これらのサイトは、アルカリに対する感受性が不均一であり、減少により保護されています。

Among the lesions induced in DNA by neocarzinostatin chromophore are spontaneous and alkali-dependent base release, sugar damage, and single-strand breaks with phosphate (PO4) at their 3' ends and PO4 or nucleoside 5'-aldehyde at the 5' ends. By measuring alkali-dependent thymine release and decomposition of the 5'-terminal thymidine 5'-aldehyde in drug-cut DNA, we show that the kinetics are the same for each process and that the nucleoside aldehyde is the source of about 85% of alkali-dependent thymine release. Reduction of the 5'-aldehyde ends to 5'-hydroxyls followed by incorporation of 32P from [gamma-32P]ATP by polynucleotide kinase permits their selective quantitation. Nucleoside 5'-aldehyde so measured accounts for over 80% of the drug-generated 5' ends; the remainder have PO4 termini. Since these techniques also include the contribution of alkali-labile sites in the measurement of PO4 ends, DNA sequencing was used to measure the ends directly. Using 3'-32P end-labeled DNA restriction fragments as substrates for the drug, it was found that drug attack at a T results in mainly two bands--the stronger one represents oligonucleotide with 5'-terminal nucleoside 5'-aldehyde and may account for over 90% of a particular break. Its structure was verified by its isolation from the sequencing gel, followed by various chemical and enzymatic treatments. In each case, the mobility of the product on the gel was altered in a predictable manner. In addition to spontaneous breaks, neocarzinostatin also causes alkali-labile breaks preferentially at T residues. These sites are heterogeneous in their sensitivity to alkali and are protected by reduction.