鳥類肉腫ウイルスRNAの安定性：サブ遺伝子種とゲノム種と細胞mRNASの比較

B77鳥類肉腫ウイルスの安定性細胞内RNAは、感染した鶏肉胚線維芽細胞を[3H]ウリジンと15時間標識し、アクチノマイシンD（1 mLあたり1微細な）を加えて、総細胞ポリ（A）含有RNAの安定性と比較しました。ウイルスRNAのさらなる転写をブロックし、総細胞ポリ（A）含有からウイルス特異的RNAを選択する3時間間隔でのRNA。3つのウイルス特異的RNA種（9.3、3.3、および5.4キロベース）は、それぞれ7.5、10、および15時間の半減期で減衰しましたが、細胞mRNAのバルクは半減期13時間で減衰しました。これらの減衰率をmRNA活性の消失と相関させるために、薬物およびウイルス特異的タンパク質合成の後、3時間ごとの間隔でアクチノマイシンD処理細胞を3時間間隔で[3H]ロイシンと相関させました。非グリコシル化ウイルス構造タンパク質（PR76GAG）の前駆体のmRNA活性は、約6時間の半減期で減衰しましたが、エンベロープタンパク質（GPR92ENV）の前駆体をコーディングするmRNA活性は、半減期の半減期で減衰しました。14時間。したがって、個々のmRNA種の減衰速度は、対応する2つの遺伝子産物の合成の減衰率と合理的によく対応していました。結果は、5.4 kb env mRNAがこれらの条件下で9.3 kb gag mRNAよりも安定しているが、細胞mRNAの大部分よりも有意に安定していないことを示した。アクチノマイシンDの添加後のウイルス粒子産生は、逆転写酵素アッセイとウイルスゲノム70S RNAの細胞外ビリオンへの取り込みによって決定されました。どちらのアッセイも同様の結果をもたらし、PR76GAG合成の減衰または9.3 kb RNAの消失よりも速度（t 1/2 = 4時間）で粒子産生が阻害されることを示しました。ただし、2つの独立した方法（パルスとチェイス、および同位体平衡へのアプローチ）によって確立されましたが、ビリオンにパッケージ化されたRNAの細胞内半減期は6〜7時間であることがあります。したがって、これらの結果は、9.3 kb RNAの単一の代謝プールが鳥類肉腫ウイルス感染細胞に存在し、mRNAおよびゲノムRNAの両方として使用されることを示唆しています。

The stabilities of B77 avian sarcoma virus intracellular RNAs were compared to the stability of the total cellular poly(A)-containing RNA by labelling infected chicken embryo fibroblasts with [3H]uridine for 15 h, adding actinomycin D (1 microgram per ml) to block further transcription of viral RNA, and selecting virus-specific RNA from the total cellular poly(A)-containing RNA at 3 hourly intervals. The three virus-specific RNA species (9.3, 3.3 and 5.4 kilobases) decayed with half-lives of 7.5, 10, and 15 h, respectively, whereas the bulk of the cellular mRNA decayed with a half-life of 13 h. To correlate these decay rates with the disappearance of mRNA activities, the actinomycin D-treated cells were pulse-labelled with [3H]leucine at 3 hourly intervals after the addition of the drug and virus-specific protein synthesis was assayed by immunoprecipitation. The mRNA activity for the precursor to the non-glycosylated viral structural proteins (Pr76gag) decayed with a half-life of approximately 6 h, whereas the mRNA activity coding for the precursor to the envelope proteins (gPr92env) decayed with a half-life of 14 h. Thus, the rate of decay of the individual mRNA species corresponded reasonably well with the decay rate for the synthesis of two of the corresponding gene products. The results indicated that the 5.4 kb env mRNA is more stable under these conditions than the 9.3 kb gag mRNA but was not significantly more stable than the bulk of the cellular mRNA. Virus particle production following the addition of actinomycin D was determined by the reverse transcriptase assay and by the incorporation of viral genomic 70S RNA into extracellular virions. Both assays yielded similar results and indicated that particle production was inhibited at a rate (t 1/2 = 4 h) somewhat faster than the decay of Pr76gag synthesis or the disappearance of 9.3 kb RNA. It was established by two independent methods (pulse and chase, and approach to isotope equilibrium), however, that the intracellular half-life of the RNA that is packaged into virions is 6 to 7 h. Thus, these results suggest that a single metabolic pool of 9.3 kb RNA exists in avian sarcoma virus-infected cells and is used both as mRNA and as genome RNA.