デュアルリポキシゲナーゼ活性を備えた酵素は、アラキドン酸からのロイコトリエンA4合成を触媒します

アラキドン酸をジャガイモ塊茎のホモジネートとインキュベートした場合、C-12のエピマー、6-トランス - ロイコトリエンB4の2つの異性体が主要生成物に加えて形成されました（5S-ヒドロペルオキシ-6-Trans-8,11,144-CIS-ICOSATETRAENO酸（5-HPETE）。ジヒドロキシ酸の生合成のメカニズムを解明するために、ジャガイモのリポキシゲナーゼは、従来のクロマトグラフィー手順と高性能液体クロマトグラフィーの組み合わせにより見かけの均質性に精製されました。クロマトフォーカスカラム（モノ-P）は、アラキドン酸とビショモガンマ - リノレン酸に作用して（5S）、（8S） - ヒドロペルオキシコサノイドを生成しましたA4は、エポキシド中間体の存在が18O2実験、メタノールトラッピング、および精製されたロイコトリエンA4ヒドロラーゼによるロイコトリエンB4へのさらなる変換、リポキシゲナーゼ阻害剤、熱処理、および競合的阻害を含むいくつかの実験を含む。5-リポキシゲナーゼとロイコトリエンA4シンターゼ活性の両方が同じタンパク質に存在し、5-HPETEからのロイコトリエンA4の形成が酵素の8-リポキシゲナーゼ活性によって触媒されたこと。

When arachidonic acid was incubated with homogenates of potato tubers, two isomers of 6-trans-leukotriene B4, epimeric at C-12, were formed in addition to the major product, (5S-hydroperoxy-6-trans-8,11,14-cis-icosatetraenoic acid (5-HPETE). To elucidate the mechanism of biosynthesis of the dihydroxy-acids, the lipoxygenase from the potato tubers was purified to apparent homogeneity by a combination of conventional chromatographic procedures and high-performance liquid chromatography equipped with a chromatofocusing column (Mono-P). The purified lipoxygenase acted on arachidonic acid and bishomo-gamma-linolenic acid to yield (5S)-hydroperoxy- and (8S)-hydroperoxyicosanoids, respectively. Furthermore, the purified enzyme converted 5-HPETE to leukotriene A4, with the presence of the epoxide intermediate being demonstrated by 18O2 experiments, methanol trapping, as well as further conversion to leukotriene B4 by the purified leukotriene A4 hydrolase. Several experiments, including those with lipoxygenase inhibitors, heat treatment, and competitive inhibition, indicated that both the 5-lipoxygenase and leukotriene A4 synthase activities resided in the same protein and that the formation of leukotriene A4 from 5-HPETE was catalyzed by the 8-lipoxygenase activity of the enzyme.