パーコールでの密度勾配遠心分離によるヒト末梢血単核細胞（PBMC）の分離とサブ分解

不連続および連続密度勾配遠心分離によるPBMCおよびTリンパ球の分離およびサブ分画のためのパーコールの使用について説明します：PBMCは、PECOLLでの不連続密度勾配遠心分離によりヒト末梢血から分離されました。フィコールイソパックの代わりにパーコールの使用は、フィコールイソパックとは対照的に、単球の密度を変えないという利点があります。したがって、パーコールでのその後の連続密度勾配遠心分離の後、リンパ球と単球のより良い分離が達成されました。E-RFCは、パーコールフィコールクッションにリンパ球とSRBCをバンドする最初の低速遠心分離ステップ後の不連続密度勾配遠心分離、および低密度のロゼットとSRBCを低密度の非RE-RFCから分離する高速遠心分離ステップの後に分離しました。この手順の利点は、パフォーマンスの短い時間であり、リンパ球/SRBCペレットを再懸濁する必要がないことです。PBMC、NPH.PBMC Tリンパ球は、Percollでの連続密度勾配遠心分離によりさらに縮小されました。ここで説明する方法は、リンパ球と単球の良好な分離をもたらしました。しかし、微小数の汚染単球を伴うリンパ球分画を得るには、連続密度勾配遠心分離によるリンパ球のさらなるサブフリクションの前に単球の枯渇をお勧めします。Percollの連続密度勾配遠心分離によってサブ分割されたTリンパ球のマーカー分析は、高密度Tリンパ球がANAE陽性リンパ球に濃縮され、2型のANAE陽性リンパ球の枯渇したANAE陽性リンパ球が濃縮されることを示しています。2型細胞とANAEタイプ1細胞の枯渇。一方、モノクローナル抗体によって分化抗原の異なる画分からのT細胞を分析する場合、かなりの違いは見られませんでした（抗LYT 3、OKT4、およびOKT8）。結果は、異なるサブクラスのT細胞ではなく、異なる機能状態でT細胞を提供するPercollでの連続密度勾配遠心分離によるTリンパ球のサブ変数を示している可能性があります。

The use of Percoll for isolation and subfractionation of PBMC and T-lymphocytes by discontinuous and continuous density gradient centrifugation is described: PBMC were isolated from human peripheral blood by discontinuous density gradient centrifugation on Percoll. The use of Percoll instead of Ficoll-Isopaque has the advantage that Percoll, in contrast to Ficoll-Isopaque, does not alter the density of monocytes. Therefore, a better separation of lymphocytes and monocytes was achieved after subsequent continuous density gradient centrifugation on Percoll. E-RFC were isolated by discontinuous density gradient centrifugation after a first low speed centrifugation step banding lymphocytes and SRBC on a Percoll-Ficoll cushion, and a subsequent high speed centrifugation step separating high density rosettes and SRBC from low density non-E-RFC. The advantage of this procedure is the short time of performance and that there is no need to resuspend the lymphocyte/SRBC pellet. PBMC, nph.PBMC T-lymphocytes were further subfractionated by continuous density gradient centrifugation on Percoll. The method described here resulted in a good separation of lymphocytes and monocytes. However, to obtain lymphocyte fractions with minute numbers of contaminating monocytes, a depletion of monocytes prior to further subfractionation of the lymphocytes by continuous density gradient centrifugation is recommended. A marker analysis of T-lymphocytes subfractionated by continuous density gradient centrifugation on Percoll shows that high density T-lymphocytes are enriched in ANAE positive lymphocytes of type 1 and depleted of ANAE positive lymphocytes of type 2. Low density T-lymphocytes are enriched in ANAE type 2 cells and depleted of ANAE type 1 cells. On the other hand, no considerable differences were found when analyzing the T-cells from different fractions for differentiation antigens by means of monoclonal antibodies (anti Lyt 3, OKT4, and OKT8). The results may indicate that subfractionation of T-lymphocytes by continuous density gradient centrifugation on Percoll provided T-cells in different functional states rather than T-cells of distinct subclasses.