銅原子の分布と部分的に銅枯渇したヘモシアニンにおける一酸化炭素の結合

ヘモシアニンの単一皮膚（半分）または銅（Met-APO）銅へのCOの結合は、ヘモシアニンに結合したCOの総量の推定を可能にする新しい方法で調査されます。ヘリックスポマティアと尋常性のタコの軟体動物ヘモシアニンでは、純粋な半分APO調製物を得ることができず、銅の結合された部位の残りの部分が常に存在します。ただし、選択的に単一の銅部位を酸化するために使用されるH2O2の添加の前後にタンパク質に結合したCoの測定は、COがハーフアポCu（I）に結合し、銅の酸化時にMet-APO Cuに放出されることを明らかにします。（ii）。COのハーフAAPOへの結合は発光に関連していないため、ネイティブカルボキシヘモシアニンの発光には部位に2番目の銅銅の存在が必要であることが証明されています。さらに、データの分析は、部分的に銅枯渇したヘモシアニンの結合銅部位の残留量が、空気中340 nmで測定された残留O2コッパーバンドによって過小評価されているが、Coの存在下での残留発光によって忠実に定量化されていることを示しています。3つの部分的に銅枯渇したヘモシアニンの部位に残っている銅の分布が描かれています。

Binding of CO to single cuprous (half-apo) or cupric (met-apo) copper of hemocyanin is investigated by a new method which allows estimation of the total amount of CO bound to hemocyanin. Pure half-apo preparations could not be obtained with the molluscan hemocyanins from Helix pomatia and Octopus vulgaris, and a residual fraction of sites with coupled copper is always present. However, the determination of CO bound to the protein before and after addition of H2O2, used to oxidize selectively single copper sites, reveals that CO binds to half-apo Cu(I), and is released upon oxidation of copper to met-apo Cu(II). Binding of CO to half-apo is not associated to luminescence, proving that luminescence of native carboxyhemocyanin demands the presence of a second cuprous copper in the site. In addition, analysis of data indicates that the residual amount of coupled copper sites in partially copper-depleted hemocyanin is underestimated by the residual O2-copper band measured at 340 nm in air, while faithfully quantitated by the residual luminescence in the presence of CO. A distribution of the copper left in the site of three partially copper-depleted hemocyanins is depicted.