大腸菌のクローン遺伝子の調節された発現に役立つハイブリッドTRP-LACプロモーターを持つベクター

強力なプロモーターが、クローン化された遺伝子の発現を促進する一連のプラスミドベクターにクローニングされています。このプロモーターは、TACと名付けられました[Deboer et al。（Rodriguez、R.L。and Chamberlin、M.J。（編）、プロモーター、構造、機能。Praeger、New York、1982、pp。462-481）]には、Lacuv5プロモーターと-35領域の-10領域が含まれています。TRPプロモーターの。当社のベクトルには、さまざまなクローニングサイトが含まれていて、その後に転写終了信号が続きます。さらに、LACプロモーターのより強いTACプロモーターへの変換を促進するプラスミドについて説明します。したがって、LACまたはLACUV5プロモーターを使用した既存の遺伝子融合は、リボソーム結合部位（RBS）を変更せずにTACプロモーター遺伝子融合に容易に変換できます。TACプロモーターはLaciq株で抑制され、イソプロピルチオベータ-D-ガラクトシド（IPTG）によって誘導される可能性があります。バクテリオファージラムダのCIリプレッサーの発現の研究は、TACプロモーターがLacuv5プロモーターの少なくとも5倍効率が高いことを示しています。最適な条件下では、ラムダリプレッサーは総細胞タンパク質の最大30％を構成します。

A strong promoter has been cloned on a series of plasmid vectors that facilitate the expression of cloned genes. This promoter, named tac [first described by DeBoer et al. (in Rodriguez, R.L. and Chamberlin, M.J. (Eds.),Promoters, Structure and Function. Praeger, New York, 1982, pp. pp. 462-481)] contains the -10 region of the lacUV5 promoter and the -35 region of the trp promoter. Our vectors contain various cloning sites followed by transcription termination signals. In addition, we describe plasmids that facilitate the conversion of the lac promoter to the stronger tac promoter. Thus, preexisting gene fusions using the lac or the lacUV5 promoter can be readily converted to tac promoter gene fusions without changing the ribosome-binding site (RBS). The tac promoter is repressed in lacIQ strains and can be induced by isopropylthio-beta-D-galactoside (IPTG). Studies of expression of the cI repressor of bacteriophage lambda show that the tac promoter is at least five times more efficient than the lacUV5 promoter. Under optimal conditions lambda repressor constitutes up to 30% of the total cellular protein.