Saccharomyces cerevisiaeにおける誘導性の分岐Gal1-Gal10プロモーターの調節要素を区切るためのlacz融合の使用

Saccharomyces cerevisiaeの914ベースペアフラグメントのDNA配列を、GAL1-GAL10 Divergentプロモーター、GAL10コーディングシーケンスの140塩基ペア、およびGAL1コーディングシーケンスの87塩基対を含むDNA配列を提示します。このフラグメントから、さまざまな種類の酵母プラスミドベクターに4組のGAL1-LACZおよびGAL10-LACZ融合を構築しました。各タイプのベクターで、融合した遺伝子はガラクトースによって誘導され、グルコースによって抑制されました。GAL4およびGAL80調節変異に対するGAL1-LACZ融合の反応は、無傷の染色体GAL1およびGAL10遺伝子の反応と類似していた。GAL10-CYC1-LACZ融合からGAL10調節シーケンスのさまざまな部分を削除した一連の削除がin vitroで構築されました。これらの削除は、完全な強度ガラクトース誘導に必要な配列と、弱い誘導に十分な配列を含む隣接するグアニンシトシンリッチ55塩基対を含む45塩基対の比較的グアニンシトシンリッチ領域を定義しました。

We present the DNA sequence of a 914-base pair fragment from Saccharomyces cerevisiae that contains the GAL1-GAL10 divergent promoter, 140 base pairs of GAL10 coding sequence, and 87 base pairs of GAL1 coding sequence. From this fragment, we constructed four pairs of GAL1-lacZ and GAL10-lacZ fusions on various types of yeast plasmid vectors. On each type of vector, the fused genes were induced by galactose and repressed by glucose. The response of a GAL1-lacZ fusion to gal4 and gal80 regulatory mutations was similar to the response of intact chromosomal GAL1 and GAL10 genes. A set of deletions that removed various portions of the GAL10 regulatory sequences from a GAL10-CYC1-lacZ fusion was constructed in vitro. These deletions defined a relatively guanine-cytosine-rich region of 45 base pairs that contained sequences necessary for full-strength galactose induction and an adjacent guanine-cytosine rich 55 base pairs that contained sequences sufficient for weak induction.