プロトプラスト誘発硬化後のストラプトコッカスlactis ncdo 712および他の乳酸連鎖球菌のプラスミド補体

細菌プロトプラストの産生と再生は、ストレプトコッカスlactis subspにおける3つの異なるプラスミド特異的特性の喪失を促進しました。ジアセチルクチス株。小さなマルチコピー分子を含む5つの異なるプラスミドの喪失は、アガロースゲル上のランダムプロトプラスト再生物質の溶解物をスクリーニングすることにより、ストレプトコッカスlactis 712で容易に検出されました。このひずみでは、プロトプラストの再生の連続的な丸いラウンドを使用して、プラスミド補体から単一の分子のみを運ぶプラスミドを含まないひずみと誘導体を生成しました。これらの実験中、33メガダルトンプラスミドであるPLP712が、乳糖とタンパク質利用のために遺伝子をコードすることがわかりました。このプラスミドのみが、牛乳中の正常な成長と酸性産生に必要でした。残りの4つのプラスミドは不可解であるように見えました。PLP712のみを運ぶ株の乳糖欠損誘導体は、容易に分離されました。これらの誘導体にはプラスミド喪失のインスタンスが含まれていましたが、PLP712の欠失が頻繁に発見されました。PLP712の多くの異なる削除された誘導体。乳糖またはタンパク質利用の決定要因またはその両方が失われたものを含むものが分離されました。PLP712の分子不安定性は、乳糖式712でのプラスミド補体の以前の観察結果を主に説明しました。プロトプラストの再生による複数のプラスミド補体からの謎めいた分子の硬化は、乳酸連鎖球菌および他のグラム陽性種で一般的に価値があることが証明される可能性があります。

The production and regeneration of bacterial protoplasts promoted the loss of three different plasmid-specified traits in Streptococcus lactis subsp. diacetylactis strains. The loss of five different plasmids, including small multicopy molecules, was readily detected in Streptococcus lactis 712 by screening lysates of random protoplast regenerants on agarose gels. In this strain sequential rounds of protoplast regeneration were used to produce a plasmid-free strain and derivatives carrying only single molecules from the plasmid complement. During these experiments a 33-megadalton plasmid, pLP712, was found to encode genes for lactose and protein utilization. Only this plasmid was required for normal growth and acid production in milk; the remaining four plasmids appeared to be cryptic. Lactose-defective derivatives of a strain carrying only pLP712 were readily isolated. Although these derivatives included instances of plasmid loss, deletions of pLP712 were frequently found. Many different deleted derivatives of pLP712, including some in which the lactose or protein utilization determinant or both were lost, were isolated. The molecular instability of pLP712 largely accounted for previous observations of plasmid complements in S. lactis 712 after lactose determinant curing or transfer by conjugation and transduction. Curing of cryptic molecules from multiple plasmid complements by protoplast regeneration may prove to be generally valuable in lactic streptococci and other gram-positive species.