イミダゾール治療ウサギからの肝臓ミクロソームシトクロムP-450アイソザイム3aおよび6の精製エタノール処理によって得られた形態のアイソザイム3aの同一性の証拠の証拠

2つの形態のシトクロムP-450は、イミダゾールで処理したウサギの肝微生物からの電気泳動均一性に精製されています。いくつかの基準は、より高い電気泳動移動度のシトクロムがエタノール誘導性アイソザイム3aと同一であることを示しています。「イミダゾール-3A」および「エタノール-3A」は同じクロマトグラフィー特性を示し、ドデシル硫酸塩 - ポリアクリルアミドゲル電気泳動に同一の電気泳動移動度を持っています。さらに、2つのタンパク質製剤は、酸化、還元、および還元状態の吸光度の最大値と吸収係数を持っています。イミダゾール-3Aおよびエタノール-3Aと後者のタンパク質を免疫したヒツジからの免疫グロブリンG画分との反応により、完全な同一性を示す単一の免疫脂肪分解バンドが観察されました。2つのタンパク質製剤のアミノ酸組成とアミノ末端の最初の10残基は、トリプシン、黄色ブドウ球菌V8プロテアーゼ、またはLys C endoprotinaseで切断時に得られたペプチドの高性能液体クロマトグラフィーマップと同様に、区別できません。さらに、これらの調製物は、エタノールのアセトアルデヒドへの酸化とアニリンのp-ヒドロキシル化において非常に類似した活性を持っています。イミダゾール処理されたウサギから分離されたより低い電気泳動移動度のシトクロムは、おそらくアイソザイム6と同一であるという証拠が得られました。スペクトル特性、アミノ酸組成、およびカルボキシル末端配列が説明されています。誘導者として、イミダゾールは、その効果がより変動し、治療の期間が短くなるというエタノールよりも利点があります。得られた肝臓ミクロソームから、P-450アイソザイム3Aおよび6、アイソザイム3Cおよび4、およびエポキシドヒドロラーゼに加えて、容易に分離できます。

Two forms of cytochrome P-450 have been purified to electrophoretic homogeneity from hepatic microsomes of rabbits treated with imidazole. Several criteria indicate that the cytochrome of higher electrophoretic mobility is identical with ethanol-inducible isozyme 3a. "Imidazole-3a" and "ethanol-3a" exhibit the same chromatographic characteristics and have identical electrophoretic mobilities upon sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis. Furthermore, the two protein preparations have the same absorbance maxima and absorption coefficients in the oxidized, reduced, and reduced-CO states. A single immunoprecipitin band exhibiting complete identity was observed upon reaction of imidazole-3a and ethanol-3a with the immunoglobulin G fraction from sheep immunized with the latter protein. The amino acid composition and first 10 residues of the amino terminus of the two protein preparations are indistinguishable, as are the high-performance liquid chromatographic maps of the peptides obtained upon cleavage with trypsin, Staphylococcus aureus V8 protease, or Lys C endoproteinase . Furthermore, these preparations have very similar activities in the oxidation of ethanol to acetaldehyde and the p-hydroxylation of aniline. Evidence was obtained that the cytochrome of lower electrophoretic mobility isolated from imidazole-treated rabbits is probably identical with isozyme 6; the spectral characteristics, amino acid composition, and carboxyl-terminal sequence are described. As an inducer, imidazole has the advantage over ethanol of being less variable in its effects and requiring a shorter period of treatment. From the resulting liver microsomes, one can readily isolate, in addition to P-450 isozymes 3a and 6, isozymes 3c and 4 as well as epoxide hydrolase.