血小板凝集におけるトロンボスポンディンの役割

ヒト血小板の主要なアルファ顆粒タンパク質であるThrombospondin（TSP）は、血小板刺激時に活性化された血小板表面に結合します。TSPには血球凝集（レクチン様）活性があり、フィブリノーゲンと特定の複合体を形成します。これらの観察に基づいて、活性化された血小板表面でのTSPとフィブリノーゲンの相互作用が血小板凝集プロセスの重要なステップである可能性があると仮定されました。この仮説をテストするために、単一特異的、親和性培養抗TSP Fab断片を調製し、血小板凝集と血小板フィブリノーゲンの結合に対するそれらの効果を研究しました。抗TSP FABは、単一血小板の消失を測定するタービドメトリックな凝集測定と粒子カウントの両方で監視されているように、トロンビンおよびコラーゲン誘発性血小板凝集と有意な干渉を引き起こしました。位相制御顕微鏡により、抗TSP FABが血小板マクロ凝集体の著しい減少と微小凝集体と非凝集した単一血小板の増加を引き起こすことが明らかになりました。抗TSP FABは、ADP誘発性血小板凝集の初期相に影響を与えませんでしたが、凝集の二次位相の廃止と急速な血小板分解を引き起こしました。抗TSP FABの効果は、血小板分泌の直接的な阻害によって媒介されませんでした。標識されたフィブリノーゲンのトロンビン刺激血小板への特異的結合に対する抗TSP FABの効果も研究されました。抗TSP FABは、活性化された血小板表面の受容体へのフィブリノーゲン結合の親和性の著しい減少を引き起こしました。速度論的分析により、抗TSP FABの存在下での非標識フィブリノーゲンによる標識フィブリノーゲンの有意な変位が明らかになり、TSPが活性化血小板表面へのフィブリノーゲンの結合を安定化し、プラテレット間相互作用の強度を強化することを示唆しています。血小板凝集は動的な多段階プロセスであり、最初は血小板膜糖タンパク質IIB/IIIA-フィブリノゲン相互作用によって支配され、TSPフィブリノゲンの相互作用が血小板凝集体のサイズと可逆性を決定する上で重要な役割を果たすことが提案されています。

Thrombospondin (TSP), the major alpha-granule protein of human platelets, binds to the activated platelet surface upon platelet stimulation. TSP has hemagglutinating (lectin-like) activity and forms a specific complex with fibrinogen. Based on these observations, it was postulated that the interaction of TSP and fibrinogen on the activated platelet surface may be an important step in the platelet aggregation process. To test this hypothesis, monospecific, affinity-purified anti-TSP Fab fragments were prepared and their effects on platelet aggregation and platelet fibrinogen binding were studied. Anti-TSP Fab caused significant interference with thrombin- and collagen-induced platelet aggregation, as monitored by both turbidometric aggregometry and particle counting measuring the disappearance of single platelets. Phase-contrast microscopy revealed that anti-TSP Fab caused a marked decrease in platelet macroaggregates and an increase in microaggregates and nonaggregated single platelets. Anti-TSP Fab did not affect the initial phase of ADP-induced platelet aggregation but caused rapid platelet disaggregation with the abolition of the secondary phase of aggregation. The effect of anti-TSP Fab was not mediated by a direct inhibition of platelet secretion. The effect of anti-TSP Fab on specific binding of labeled fibrinogen to thrombin-stimulated platelets was also studied. Anti-TSP Fab caused a marked decrease in the affinity of fibrinogen binding to the receptors on the activated platelet surface. Kinetic analyses revealed significant displacement of labeled fibrinogen by unlabeled fibrinogen in the presence of anti-TSP Fab, suggesting that TSP serves to stabilize fibrinogen binding to the activated platelet surface and reinforces the strength of interplatelet interactions. It is proposed that platelet aggregation is a dynamic, multistep process, governed initially by the platelet membrane glycoprotein IIb/IIIa-fibrinogen interaction, with the TSP-fibrinogen interaction playing an important role in determining the size and reversibility of platelet aggregates.