モロニーマウス白血病ウイルスのGAGタンパク質P12およびP15の変異は、感染の初期段階をブロックする

GAG遺伝子に欠失を伴うモロニーマウス白血病ウイルスの変異体のコレクションは、クローン化されたプロビラルDNAの制限酵素部位指向変異誘発によって生成されました。変異体にはすべて、P12領域のNARIサイトの削除が含まれており、一部は隣接するP15領域に拡張された削除を含んでいた。削除は、ウイルス粒子のアセンブリまたは放出に大きな影響を与えませんでした。内因性逆逆転写産物の検査により、マイナスおよびプラス鎖の強いストップDNAの正常な合成が示され、RNAゲノムがパッケージ化され、洗剤透過化されたビリオンの逆転写が損なわれていないことを示しています。ビリオン粒子には、P15-P12融合タンパク質に対応する高レベルの異常タンパク質が含まれていました。この異常なタンパク質のタンパク質分解処理は、すべての変異によって完全にブロックされました。粒子の感染性は劇的に減少しました。感染したNIH/3T3細胞の低分子重量DNAの分析は、変異体ビリオンがウイルスDNA合成を実行できないことを示しました。これらのデータは、P12およびP15タンパク質がビリオンアセンブリにとって重要ではないかもしれないが、ウイルス感染の初期段階で重要な役割を果たすことを示唆しています。

A collection of mutants of Moloney murine leukemia virus with deletions in the gag gene was generated by restriction enzyme site-directed mutagenesis of a cloned proviral DNA. The mutants all contained deletions of the NarI site in the P12 region, and some contained deletions extending into the adjacent P15 region. The deletions did not significantly affect the assembly or release of viral particles. Examination of endogenous reverse transcription products demonstrated normal synthesis of minus- and plus-strand strong-stop DNAs, indicating that the RNA genome was packaged and that reverse transcription in detergent-permeabilized virions was not impaired. The virion particles contained high levels of an abnormal protein which corresponded to a P15-P12 fusion protein; proteolytic processing of this abnormal protein was completely blocked by all the mutations. The infectivity of the particles was dramatically reduced. Analysis of the low-molecular-weight DNA in infected NIH/3T3 cells indicated that the mutant virions could not carry out viral DNA synthesis. These data suggest that the P12 and P15 proteins may not be critical for virion assembly but do play an important role in early steps of viral infection.