S-アデノシルメチオニンの放射測定アッセイ：カルシウム依存性疎水性相互作用クロマトグラフィーによるカルモジュリン（リジン）N-メチルトランスフェラーゼ

組織抽出物中のS-アデノシルメチオニン：カルモジュリン（リジン）N-メチルトランスフェラーゼの放射線アッセイが開発されました。このアッセイは、Dictyostelium discoideumの非Nメチル化カルモジュリンを基質およびカルシウム依存性疎水性相互作用クロマトグラフィーとして利用して、反応生成物であるN-メチル化カルモジュリンを分離します。このアッセイは、[メチル-3H] S-アデノシルメチオニンからカルモジュリンへの3H標識メチル基の移動を測定します。メチル化されたカルモジュリンは、EDTAおよびタンパク質カルボキシルメチルエステルを含むフェニルセファロース柱から溶出し、[メチル-3H]カルモジュリンの液体シンチレーションカウントの前に熱処理により除去されます。このアッセイは、以前に採用された酸前沈着アッセイよりも具体的で、より敏感で、より正確であり、多数のサンプルのアッセイにより容易に役立ちます。

A radiometric assay for S-adenosylmethionine:calmodulin(lysine)N-methyltransferase in tissue extracts has been developed. This assay utilizes the non-N-methylated calmodulin from Dictyostelium discoideum as a substrate and calcium-dependent hydrophobic interaction chromatography to isolate the reaction product, N-methylated calmodulin. The assay measures the transfer of 3H-labeled methyl groups from [methyl-3H]S-adenosylmethionine to calmodulin. Methylated calmodulin is eluted from phenyl-Sepharose columns with EDTA and protein carboxylmethyl esters are removed by heat treatment prior to liquid scintillation counting of [methyl-3H]calmodulin. This assay is more specific, more sensitive, and more precise than the acid-precipitation assay previously employed and lends itself more readily to the assay of large numbers of samples.