ホスホリパーゼA2のアッセイの基質としてのホスファチジルコリンのジチオレスター類似体のキラル合成

ホスファチジルコリン、1,2-ビス（Heptanoylthio）-1,2-dideoxy-Sn-glycerol-3-ホスホコリン（Thio PC）のジチオレスター類似体の合成について説明します。1-トリチル-Sn-グリセロール（D-マンニトールから調製）から始まる、星酸カリウムでの変位がトリチオ炭酸塩を与えました。後者の還元的切断により、1,2-ジチオールが得られ、それがアシル化され、デトリチル化され、コリンリン酸でエステル化されました。ホスホリパーゼA2（Naja naja）によるチオPCの加水分解により、95％のキラル純度が示されました。基質濃度の関数としての加水分解速度は、脂質の重要なミセル濃度である約0.17 mmで急激な増加を示しました。ホスホリパーゼA2の分光光度測定アッセイ（ジチオニトロベンゾ酸の存在下で放出されたチオール基の測定による）は非常に敏感でした。わずか1 ngの酵素が検出され、1分あたり約0.2 nmolの基質加水分解速度を表します。

The synthesis of a dithiolester analog of phosphatidylcholine, 1,2-bis(heptanoylthio)-1,2-dideoxy-sn-glycerol-3-phosphocholine (thio PC), is described. Starting with 1-trityl-sn-glycerol (prepared from D-mannitol), tosylation followed by displacement with potassium methyl xanthate gave a trithiocarbonate. Reductive cleavage of the latter gave a 1,2-dithiol which was then acylated, detritylated, and esterified with choline phosphate. Hydrolysis of thio PC by phospholipase A2 (Naja naja) indicated 95% chiral purity. The rate of hydrolysis as a function of substrate concentration showed a sharp increase at about 0.17 mM, the critical micellar concentration of the lipid. A spectrophotometric assay of phospholipase A2 (by measurement of released thiol groups in the presence of dithionitrobenzoic acid) was quite sensitive. As little as 1 ng of enzyme was detected, representing a rate of about 0.2 nmol of substrate hydrolyzed per min.