膜結合コハク酸デヒドロゲナーゼと基質および競合阻害剤との相互作用

N-エチルマレイミドによる膜結合コハク酸デヒドロゲナーゼ、KIおよびKS測定の定常状態の速度論的方法、および平衡研究により、膜結合コハク酸デヒドロゲナーゼの活性部位指向阻害に及ぼすジカルボン酸塩の保護効果を使用して、コハクネート、腫瘍の相対的な親和性を定量化するために採用されました。、酵素の還元および酸化種へのマロン酸およびオキサロ酢酸。還元および酸化されたコハク酸デヒドロゲナーゼのコハク酸塩、フマラート、オキサロ酢酸の相対的親和性に10倍以上の差が見られますが、活性サイトのスルフィドリル基の反応性は酵素の酸化還元状態に依存しません。膜結合コハク酸デヒドロゲナーゼのオキサロ酢酸に対する親和性の酸化還元状態依存性の変化は、酵素の減少時に発生する酵素阻害剤複合体の解離速度の10倍の増加によって定量的に説明できます。得られたデータは、触媒作用に重要な活性部位以外のスルフィドリル基の存在、またはコハク酸デヒドロゲナーゼ分子における別のジカルボン酸特異的調節部位の存在のいずれにもサポートされていません。

The protective effect of dicarboxylates on the active-site-directed inhibition of the membrane-bound succinate dehydrogenase by N-ethylmaleimide, steady-state kinetics methods for Ki and Ks determinations, and equilibrium studies were employed to quantitate the relative affinities of succinate, fumarate, malonate and oxaloacetate to the reduced and oxidized species of the enzyme. A more than 10-fold difference in the relative affinities of the reduced and oxidized succinate dehydrogenase to succinate, fumarate and oxaloacetate is found, whereas the reactivity of the active-site sulphydryl group does not depend on the redox state of the enzyme. The redox-state-dependent changes in the affinity of the membrane-bound succinate dehydrogenase to oxaloacetate can be quantitatively accounted for by a 10-fold increase in the rate of dissociation of the enzyme-inhibitor complex which occurs upon reduction of the enzyme. The data obtained give no support for either the existence of a sulphydryl group other than the active-site one important for the catalysis or for the presence of a separate dicarboxylate-specific regulatory site in the succinate dehydrogenase molecule.