in vivoにおける化学物質の共有結合DNA結合のための32Pポストラベル試験：さまざまな芳香族発がん物質およびメチル化剤への応用

in vivoでマウスまたはラット組織をin vivoに曝露した後の32pポストラベルアッセイにより、7つのアゾアミンと誘導体、3つのアゾ化合物、2つのニトロアララマ科、12のポリクリック芳香族炭化水素、および4メチル化を含む合計28の化合物、および4メチル化を含む32pポストラベルアッセイにより、発がん - DNA付加物が検出および決定されました。エージェント。DNAは、個々の発がん物質で治療した後、マウス皮膚、マウス肝臓、およびラット肝臓から分離され、次に酵素的に消化し、デオキシリボヌクレオシド3'-モノリン酸塩を消化し、5'-32p標識デオキシリボヌクレオシド3 '、5'-ビスリン酸塩に変換されました。[ガンマ-32p] ATPからのポリヌクレオチドキナーゼ触媒[32p]リン酸転移。ヌクレオチドは、アニオン交換T.L.Cによって分解されました。ポリエチレンイミンセルロースで、オートラジオグラフィーによって検出されました。芳香族発癌物質の低レベルのDNA結合の測定は、付加ヌクレオチドの分解能の前に正常なヌクレオチドの除去を伴いました。この目的のために、逆相T.L.Cを採用する代替手順考案されたのは、定量的にマイナーな付加物の検出に利点を提供しました。説明されている手順では、約10（8）の正常なヌクレオチドで1芳香族DNA付加物の検出が可能になりましたが、メチル化付加物の検出の限界は、約6 x 10（5）ヌクレオチドの1付加物でした。結果は、多様な構造の多数の発がん物質DNA付加物が、ポリヌクレオチドキナーゼ触媒リン酸化による32p標識の基質であることを示しています。in vivoでの共有結合DNA付加物形成は、大部分の化学発がん物質の重要な特性であると思われるため、哺乳類組織のDNA付加物の32pポストラベル分析は、潜在的な発がん性の化学物質のスクリーニングのテストとして役立つ可能性があります。

Carcinogen--DNA adducts were detected and determined by 32P-postlabeling assay after exposure of mouse or rat tissues in vivo to a total of 28 compounds comprising 7 arylamines and derivatives, 3 azo compounds, 2 nitroaromatics, 12 polycyclic aromatic hydrocarbons, and 4 methylating agents. DNA was isolated from mouse skin, mouse liver, and rat liver after treatment with the individual carcinogens, then digested enzymatically to deoxyribonucleoside 3'-monophosphates, which were converted to 5'-32P-labeled deoxyribonucleoside 3',5'-bisphosphates by T4 polynucleotide kinase-catalyzed [32P]phosphate transfer from [gamma-32P]ATP. The nucleotides were resolved by anion-exchange t.l.c. on polyethyleneimine-cellulose and detected by autoradiography. The determination of low levels of DNA binding of the aromatic carcinogens entailed the removal of normal nucleotides prior to the resolution of adduct nucleotides. For this purpose, an alternative procedure employing reversed-phase t.l.c. was devised which offered advantages for the detection of quantitatively minor adducts. The procedures described enabled the detection of 1 aromatic DNA adduct in approximately 10(8) normal nucleotides, while the limit of detection of methylated adducts was 1 adduct in approximately 6 X 10(5) nucleotides. The results show that a great number of carcinogen-DNA adducts of diverse structure are substrates for 32P-labeling by polynucleotide kinase-catalyzed phosphorylation. Because covalent DNA adduct formation in vivo appears to be an essential property of the majority of chemical carcinogens, 32P-postlabeling analysis of carcinogen--DNA adducts in mammalian tissues may serve as a test for the screening of chemicals for potential carcinogenicity.