細胞酵素結合免疫特異的アッセイ（CELISA）I細胞表面抗原に対する抗体を検出する新しいマイクロムソッド

リンパ球に結合したヒト抗HLA抗体を検出できる新規の間接的な免疫測定法が開発されました。この細胞酵素結合免疫特異的アッセイ（CELISA）は、アルカリホスファターゼに共有結合した抗グロブリンを利用して、細胞表面HLA抗原に結合した抗HLA抗体の量を定量化します。セリサ中、V底のポリビニルマイクロプレートは、わずか5マイクロリットルの血清、および1あたりわずか25,000リンパ球をウェルあたりわずか25,000リンパ球にインキュベートした容器として機能しました。酵素基質を追加する前に、元のV底プレートからフラットボトムプレートに細胞を伝達するための迅速で簡単な手法を考案しました。この戦略を使用して、異なるタンパク質免疫反応剤のプラスチックへの非特異的な吸着のためにバックグラウンドノイズが排除されました。この戦略は、最適な細胞濃度と最適なコンジュゲート源と希釈の同定により、微小脱力毒性試験によって決定されるように、最大​​力価を250倍希釈した血清の抗HLA活性を検出することができました。このアッセイは、細胞表面抗原に結合した抗体を敏感かつ客観的に定量化できるため、移植、血液バンキング、自己免疫疾患、腫瘍免疫学、および細胞表面分化とウイルス抗原の研究で価値がある可能性があります。

A novel, indirect immunoassay capable of detecting human anti-HLA antibody bound to lymphocytes has been developed. This cellular enzyme-linked immunospecific assay (CELISA) utilizes an antiglobulin covalently linked to alkaline phosphatase to quantitate the amount of anti-HLA antibody bound to cell-surface HLA antigens. During the CELISA, V-bottom polyvinyl microplates served as the receptacle in which as little as 5 microliters of sera and as few as 25,000 lymphocytes per well were incubated. We devised a rapid and simple technique to transfer the cells from the original V-bottom plate to a flat-bottom plate before adding the enzyme substrate. Using this strategy, background noise because of the nonspecific adsorption of the different protein immunoreactants to plastic was eliminated. This strategy, the identification of an optimal cell concentration and an optimal conjugate source and dilution, enabled us to detect the anti-HLA activity in sera diluted out 250-fold more than their maximum titer as determined by the microdroplet cytotoxicity test. Since this assay is capable of sensitively and objectively quantitating antibody bound to cell-surface antigens, it may be of value in the areas of transplantation, blood banking, autoimmune disease, tumor immunology, and the study of cell-surface differentiation and viral antigens.