「ダブシル塩化物」による液体クロマトグラフィーによる尿中アミノ酸の測定

0.5 mLの尿中のアミノ酸を測定するための「高性能」液体クロマトグラフィー手順について説明します。この手順には、「ダブシル塩化物」（4-ジメチルアミノアゾベンゼン-4'-スルホニル塩化物）を含む尿サンプル中のアミノ酸の直接誘導体化が含まれます。このダブシレート化アミノ酸溶液のアリコートは、モーバル相として、エタノール/酢酸ナトリウム（20 mmol/L、pH 4.0）4/6（vol。）を使用して、ムボンボンダパックC18カラムで分析されます。ダブシル化アミノ酸は、425 nmでの吸光度によって検出され、ピークの高さを測定することにより定量化されます。この手順により、16 mg/L近くの濃度で尿中のアミノ酸の信頼できる分析が可能になります。列上のこの分析の感度は、5 ng/サンプルに近づきます。一部の癌患者の尿中には、より高い尿トリプトファン濃度が見つかりましたが、がん患者と対照被験者の間で尿グリシンに有意差は見られませんでした。現在の方法は、フェニルケト酸尿症のフェニルアラニンを検出するための簡単な手順であることが示されました。この手順の拡張は、アミノアシドゥリアの他の先天性誤差のスクリーニングをお勧めします。

We describe a "high-performance" liquid-chromatographic procedure for measuring amino acids in 0.5 mL of urine. The procedure includes direct derivatization of amino acids in urine samples with "dabsyl chloride" (4-dimethylaminoazobenzene-4'-sulfonyl chloride). An aliquot of this dabsylated amino acid solution is analyzed on a muBondapak C18 column with ethanol/sodium acetate (20 mmol/L, pH 4.0) 4/6 (by vol.), as mobile phase. Dabsylated amino acids are detected by their absorbance at 425 nm and quantitated by measuring peak heights. The procedure allows for the reliable analysis of amino acids in urine at concentrations near 16 mg/L. The sensitivity of this analysis on column approaches 5 ng/sample. Higher urinary tryptophan concentrations were found in the urines of some cancer patients, whereas we saw no significant difference in urinary glycine between cancer patients and control subjects. The present method was shown to be a straightforward procedure for detecting phenylalanine in phenylketonuric urine. Extension of this procedure to screening for other inborn errors of aminoaciduria is recommended.